[发明专利]一种可诱导癌细胞凋亡的载体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种可诱导癌细胞凋亡的载体及其应用。

背景技术

caspase-3是参与细胞凋亡信号通路中众多半胱天冬酶的一种，正常情况下caspase-3以无活性酶原的形式存在于细胞浆中。当细胞在一系列内源性基因的调控下要发生凋亡时，处于细胞凋亡信号通路上游起始凋亡的半胱天冬酶便被激活，而caspase-3正是被这些上游的caspases激活，生成活化的caspase-3p17和p12亚基，两种亚基再组装成活性形式的caspase-3，发挥其执行凋亡的功能。所以caspase-3通常被认为是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶。

目前，虽然双启动子载体可用于两个基因的协同表达，但是两个基因往往会转录干扰和/或不同水平的表达，有时报告基因表达了但插入的目的基因不一定表达。

发明内容

本发明的目的是提供一种重组表达载体，该载体可同时表达两个蛋白，这两个蛋白可形成活性形式的caspase-3，进而激活细胞凋亡信号通路，促进肿瘤细胞凋亡。

本发明提供了转录融合双基因片段K，自上游至下游依次为caspase-3P17亚基基因序列、IRES序列和caspase-3P12亚基基因序列。

所述caspase-3P17亚基基因序列是如下1)或2)或3)的DNA分子：

1)其核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；

3)与序列表中序列1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的DNA分子。

所述IRES序列是如下4)或5)或6)的DNA分子：

4)其核苷酸序列是序列表中序列3所示的DNA分子；

5)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；

6)与序列表中序列3限定的DNA序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的DNA分子。

所述caspase-3P12亚基基因序列是如下7)或8)或9)的DNA分子：

7)其核苷酸序列是序列表中序列2所示的DNA分子；

8)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；

9)与序列表中序列2限定的DNA序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的DNA分子。

上述严格条件可为在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

含有上述任一所述基因片段K的表达盒或重组表达载体均属于本发明的保护范围。

所述重组表达载体为真核表达载体。

所述载体中还可包含PBR322复制起点和/或氨苄青霉素抗性基因。

所述重组表达载体可按照基因工程领域的常规方法构建，如可按照如下方法构建PCRC：

所述PCRC是将IRES序列插入质粒PC1的caspase-3P17亚基基因序列和caspase-3P12亚基基因序列间得到的；

所述质粒PC1是将pcDNA3.1(-)的XbaI和BamHI位点间的小片段取代为caspase-3P17和caspase-3P12亚基基因序列得到的。

含有上述任一所述基因片段K的细胞系或重组菌也都属于本发明的保护范围。

所述重组表达载体、表达盒、细胞系和重组菌均可应用于制备诱导癌细胞凋亡的药物或抗癌药物。

本发明通过IRES将caspase-3P17亚基基因和caspase-3P12亚基基因融合形成转录融合双基因，将该转录融合双基因插入真核表达载体得到的重组表达载体可以在转染细胞中高效地表达活性形式的caspase-3，从而激活细胞凋亡信号通路，促进细胞凋亡。将本发明的重组表达载体转入癌细胞，可以有效地诱导肿瘤细胞的凋亡，为基因治疗提供新的手段。本发明的重组表达载体可以用于制备诱导癌细胞凋亡的药物或抗癌药物。本发明将在生物医药领域及基因功能的研究中发挥重要作用，应用前景广阔。

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。

附图说明

图1为针对PARP的western blot图

具体实施方式