[发明专利]一种钩端螺旋体IgM抗体快速检测试纸条

权利要求书

1.一种检测试纸条，包括反应膜和结合物释放垫，所述反应膜 具有同时包被钩端螺旋体属特异性抗原ompL1和LipL32的检测带和 包被二抗IgG的质控带；所述结合物释放垫包被有胶体金标记的抗人 IgM单克隆抗体；所述反应膜为硝酸纤维素膜，结合物释放垫为玻璃 纤维膜，所述的二抗IgG为抗鼠IgG；

所述胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体通过以下方法制备得到： 抗人IgM单克隆抗体胶体金标记的pH值为8.0，胶体金和抗体的配 比为40μg/ml胶体金，标记胶体金经稳定剂处理后，按每平方厘米65μl 的量，取胶体金-抗原结合物溶液，均匀吸附于玻璃纤维上，所述稳 定剂配方为0.5%BSA，pH8.0，0.01M Tris缓冲液；

硝酸纤维素膜上包被抗原的方法为：将表达蛋白ompL1和LipL32 按1:1混合，用0.01M PBS稀释成3mg/ml，将抗鼠IgG多克隆抗体用 0.01M PBS稀释成2mg/ml，用喷膜机将二者以1μl/cm的量喷于硝酸纤 维膜上，分别形成检测线和对照线；所述钩端螺旋体属特异性抗原 ompL1和LipL32是应用基因工程方法重组表达获得，PCR扩增LipL32 的引物序列为：

5’GCCGAATTCATGAAAAAACTTTCGATTTTG3’

5’GCCCTCGAGTTACTTAGTCGCGTCAGAAGC3’

PCR参数：95℃5min；95℃1min，50℃30s，70℃1min，30个 循环；最后70度延伸10min；

PCR扩增ompL1的引物序列为：

5’GCCGATATCATGAGAAAATTATCTTCTCTA3’

5’GCACTCGAGTTACTTTGCGTTGCTTTCGTC3’

PCR参数：95℃5min；95℃1min，55℃30s，72℃1min，30个 循环；最后72度延伸10min。

2.一种制备权利要求1所述试纸条的方法，其包括如下步骤：

1）制备钩端螺旋体属特异性抗原ompL1和LipL32；

2）将步骤1）制备的钩端螺旋体属特异性抗原ompL1和LipL32 以及二抗IgG在反应膜上分别形成检测带和质控带，备用；

3）用胶体金标记抗人IgM单克隆抗体，并包被到结合物释放垫 中；

4）将制备好的反应膜以及结合物释放垫与样本垫、吸水垫和反 应支持物组装成试纸条。