[发明专利]同型半胱氨酸-叶酸免疫胶体金层析联合检测卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用胶体金免疫层析技术联合检测血液中同型半胱氨酸-叶酸水平的检测卡及其制备方法，属于医学检验领域。

背景技术

同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是人体内蛋氨酸代谢的中间产物，同时参与了体内转硫化作用途径。Hcy通过B12在5-甲基四氢叶酸存在下经叶酸循环重新甲基化为蛋氨酸，随后产生的5，10-二甲基四氢叶酸被甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)还原成5-甲基四氢叶酸。Hcy也能被甘氨酸三甲内盐重甲基化为蛋氨酸。重甲基化在肝脏及肾脏中完成，蛋氨酸循环中，食物中蛋氨酸转化为S-腺苷甲硫氨酸(SAM)，SAM以作为甲基转移酶甲基组供体的底物，在甲基转移酶作用下产生唯一产物S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)，SAH经SAH水解酶水解为Hcy及腺苷。

如因各种原因引起血Hcy浓度升高，可发生Hcy尿症或高Hcy血症，并对动脉血管造成伤害。研究认为Hcy是一新的血管系统疾病的独立危险因子，与心血管疾病、脑梗塞、外周血管性疾病有关，也与叶酸或维生素B12、B6的缺乏相关。六十年代末，Mc Cully从病理上发现高胱氨酸尿症和胱硫醚尿症患者早期即可发生全身动脉粥样硬化和血栓形成，七十年代初他又通过动物模型证实同型半胱氨酸血中蓄积可导致类似血管损害，八十年代人们提出高同型半胱氨酸血症是动脉粥样硬化和冠心病的一个独立危险因素，尤其是冠状动脉粥样硬化和心肌梗塞的危险指标，它的浓度升高程度与疾病的危险性成正比，被誉为“心脏新杀手”。目前不少研究表明高HCY是脑血管疾病危险因素指标，是缺血性脑血管病、脑梗死的独立危险因子，高Hcy和脑卒中疾病发生密切相关。

叶酸(Folate)是一组化学结构相似，生化特性相近的化合物统称，是由喋啶、对氨基苯甲酸和1个或多个谷氨酸结合而成，其与维B12一起用以合成肌体必须的DNA，缺乏会导致巨幼红细胞贫血；妇女孕前或妊娠早期缺乏叶酸是神经管畸形发生的重要病因之一；同时，叶酸与同型半胱氨酸代谢关系密切，叶酸缺乏可使同型半胱氨酸向蛋氨酸转化出现障碍，进而导致同型半胱氨酸血症，从而导致心血管发病风险，故检测叶酸水平对预防心血管疾病的发生亦具有重要的生物学意义。

Hcy检测目前主要采用的技术方法有：高效液相(HPLC)方法、荧光偏振免疫检测(FPLA)方法、酶联免疫技术(ELISA)和化学发光法等。目前叶酸的检测方法主要有：微生物法、同位素放射免疫法，此外还有气相色谱-质谱检测、色谱分析法、离子捕获法、克隆酶供体免疫测定法(CEDIA)、酶联配体吸附试验(ELLSA)和化学发光受体实验等。高效液相(HPLC)方法操作比较复杂，试验耗时比较长，且试验数据变异比较大。荧光偏振免疫检测(FPLA)方法检测费时，须配备专用全自动荧光分析仪器，设备昂贵，不宜普及。酶联免疫技术(ELISA)大部分操作为手工操作，比较耗时，定量检测需配备仪器，必须有专门的实验室。化学发光法，检测时间在2小时以上，且价格昂贵。以上方法均不适于在基层检验场所应用。免疫胶体金层析技术操作简单、快速、灵敏和特异性好，用于同型半胱氨酸和叶酸的快速检测，有益于同型半胱氨酸和叶酸基层医疗机构检测的普及，此项技术虽然是一种较为成熟的技术，但对不同的抗原抗体系统的应用有差异，包括原料来源，试剂配制，生产工艺等都不同，需进行新的设计和试验。目前国内外均未查到有用于联合检测同型半胱氨酸-叶酸的免疫胶体金层析快速诊断联合检测卡，包括文献报道和发明专利。

发明内容

为克服现有同型半胱氨酸与叶酸检测技术的不足，本发明提供一种快速检测同型半胱氨酸-叶酸的联合检测卡。本发明根据胶体金免疫层析技术特点和抗原抗体系统特点，设计新的原材料，试剂和工艺流程，应用本发明提供的联合检测卡检测同型半胱氨酸-叶酸水平，具有简单，快速，灵敏和特异性好等特点，15分钟以内出结果，并且价格低，适用于基层检测和临床初筛。

本发明所述联合检测卡是由底板(1)上依次接合吸水垫(2)、特定包被的硝酸纤维膜(3)、涂覆胶体金标记特异抗体的玻璃纤维胶体金结合垫(4)、样品垫(5)而组成的条形物；所述玻璃纤维胶体金结合垫涂覆胶体金标记特异抗体为S腺苷同型半胱氨酸单克隆抗体和叶酸单克隆抗体。检测样品经过样品垫和结合垫再经层析作用在NC膜上出现捕获线和质控线，用肉眼判断结果。在NC膜上仅仅出现一条质控线，结果为阳性，在NC膜上同时出现捕获线和质控线，结果为阴性，不出现线条表示试纸条或测试卡失效。15分钟内出结果。

本发明所述联合检测卡吸水垫为一种滤纸，包括吸水纸和滤油纸，切成要求大小直接使用。贴在底板的末端，起吸水作用。