[发明专利]检测氟苯尼考及氟苯尼考胺的方法及其专用酶联免疫试剂盒有效
申请号: | 200810114821.2 | 申请日: | 2008-06-12 |
公开(公告)号: | CN101299045A | 公开(公告)日: | 2008-11-05 |
发明(设计)人: | 沈建忠;骆鹏杰;万宇平;史为民;江海洋;曹兴元;冯才伟;李建成;王战辉 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
主分类号: | G01N33/543 | 分类号: | G01N33/543;G01N33/535 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人: | 关畅;任凤华 |
地址: | 100094*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 氟苯尼考 氟苯尼考胺 方法 及其 专用 免疫 试剂盒 | ||
1.一种检测氟苯尼考和氟苯尼考胺的酶联免疫试剂盒,包括氟苯尼考胺特异性抗体及包被原和酶标记物;所述包被原为氟苯尼考胺半抗原与载体蛋白的偶联物或抗抗体;所述酶标记物为酶标抗抗体或酶标氟苯尼考胺半抗原;当所述包被原为氟苯尼考胺半抗原与载体蛋白的偶联物时,所述酶标记物为酶标抗抗体;当所述包被原为抗抗体时,所述酶标记物为酶标氟苯尼考胺半抗原;所述氟苯尼考胺半抗原是将氟苯尼考胺和对羧基苯甲醛通过缩合反应得到的;
所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶;
所述试剂盒还包括氟苯尼考胺标准溶液、显色液、浓缩洗涤液、终止液、浓缩复溶液、包被缓冲液、封闭液;
所述浓缩洗涤液为pH 7.4、0.02M的含有0.05%叠氮钠防腐剂的磷酸盐缓冲液;
当标记酶为辣根过氧化物酶时,所述显色液由显色液A液和显色液B液组成,显色液A液为过氧化氢或过氧化脲,显色液B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺,终止液为1~2mol/L硫酸或盐酸溶液;当标记酶为碱性磷酸酯酶时,显色剂为4-硝基酚磷酸盐缓冲液,终止液为1~2mol/L氢氧化钠溶液;
所述浓缩复溶液为含有0.1%牛血清白蛋白的0.03-0.06mol/L的磷酸盐缓冲液;
所述包被缓冲液为pH值为9.6的0.01-0.05mol/L的碳酸盐缓冲液;所述封闭液是含有0.01%叠氮化钠和10%牛血清白蛋白的磷酸盐溶液。
2.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒,其特征在于:所述氟苯尼考胺特异性抗体为氟苯尼考胺多克隆抗体,是以氟苯尼考胺半抗原与载体蛋白的偶联物作为免疫原得到的;所述载体蛋白为鼠血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的酶联免疫试剂盒,其特征在于:所述抗抗体为羊抗兔抗抗体。
4.一种检测氟苯尼考和氟苯尼考胺的方法,包括以下步骤:
1)样品前处理:
称取2g动物组织匀浆物置离心管中,加入10ml三氯乙酸-PBS缓冲液,混匀;室温以3000g以上的速度离心5min;取上清液,加入与上清液等体积的0.02M的PBS缓冲液,混匀,取样进行分析;
2)利用权利要求1-3中任一所述的检测氟苯尼考和氟苯尼考胺的酶联免疫试剂盒检测样品。
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