[发明专利]一种可兼用作溶血剂的破膜剂及其用法

说明书

技术领域

本发明属于医疗检测用试剂领域。具体涉及用于流式细胞仪的辅助检测用试剂。

背景技术

随着流式细胞仪的普及和应用，其配套试剂的开发和研制也日益重要。目前，国内很多医院和实验室都使用国外进口的溶血剂和破膜剂，如BDIS，BD-Pharmingen，Immunotech，Caltag等公司的产品。普遍存在用途单一、裂解不完全、目的细胞丢失、价格昂贵等缺点。

发明内容

本发明针对现有技术的缺点，提供用于流式细胞分析的破膜剂，以及将其稀释后的溶血剂，其检测的特异性和敏感性等方面明显优于进口试剂，检测成本低，稳定性好，使用简便易行，适用于科研和临床流式检测。

本发明还提供此破膜剂的配制方法和使用方法。

本发明涉及的破膜剂的主要成分和配制方法为：

皂角苷(saponin)               0.1-0.5％

叠氮化钠(NaN₃)                0.05-0.5％

多聚甲醛(paraformaldehyde)    1-4％；

首先准确称取多聚甲醛，置于0.01M磷酸盐缓冲液(Phosphatebuffered saline，简称PBS)中，在37℃水浴箱中水浴1-2小时。若有部分不溶解，可以逐滴加入0.01M的氢氧化钠(NaOH)助溶，直至完全溶解。待冷却后，分别加入皂角苷和NaN₃，用0.01M PBS补足体积(总体积为1)；调整pH 7.0-7.4(25℃)；最后用G5漏斗除菌、过滤。制得破膜剂，为方便叙述，将此破膜剂简称A液。

本发明采用的皂角苷是从植物中提取，由皂角苷元和糖、糖醛酸或其他有机酸组成的。有刺激性气味，能溶于水；本发明采用的多聚甲醛是低分子量多聚甲醛((CH₂O)_n)，为白色结晶粉末，不溶于乙醇，微溶于冷水，溶于稀酸、稀碱。

此破膜剂A液可直接用于流式细胞仪分析细胞内免疫指标。

另外，本发明涉及的破膜剂A液可稀释后用作溶血剂，采用特定浓度范围的NaN₃、多聚甲醛的0.01M磷酸盐缓冲液溶液，将破膜剂中的皂角苷稀释为皂角苷含量为0.05％，制得溶血剂。

特别的，可采用与溶血剂中NaN₃、多聚甲醛的浓度相同的NaN₃、多聚甲醛(其范围分别为0.05-0.5％和1-4％)的0.01M磷酸盐缓冲液溶液，将破膜剂中的皂角苷稀释为皂角苷含量为0.05％，制得溶血剂。也就是说，稀释可采用以下成分和配比的稀释剂进行：

NaN₃                 0.05-0.5％

多聚甲醛             1-4％

0.01M磷酸盐缓冲液    余量；

稀释剂中各成分的浓度与权利要求1所述的破膜剂中相同成分的浓度相同。

制得的溶血剂的成分和配比为：

皂角苷               0.05％

NaN₃                 0.05-0.5％

多聚甲醛             1-4％

0.01M磷酸盐缓冲液    余量。

稀释可采用相应体积的与A液中NaN₃、多聚甲醛的浓度一致NaN₃和多聚甲醛的0.01M磷酸盐缓冲液溶液分别稀释；也可以加入相应重量份的NaN₃、多聚甲醛和磷酸盐后，加入蒸馏水稀释；还可以将NaN₃和多聚甲醛与磷酸缓冲液配置成稀释剂稀释。优选的稀释方法为将NaN₃、多聚甲醛与磷酸缓冲液配置成可稳定保存的浓溶液，使用前用蒸馏水稀释用作稀释剂。

优选稀释方法详述如下：

1)配置下列成分和组成的溶液，为便于叙述，将此稀释剂浓溶液称为B溶液：

叠氮化钠(NaN₃)                0.5-5％

多聚甲醛(paraformaldehyde)    10-40％

0.1M磷酸盐缓冲液              余量

为方便保存和稀释，一般可将B溶液的各组分的具体浓度配置为相应A液中同样组分浓度的10倍；