[发明专利]一种预测高血压继发左心室肥厚的方法及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种预测高血压继发左心室肥厚的方法及检测试剂盒，更具体地说是内皮型一氧化氮合酶基因多态位点在预测中国人高血压继发左心室肥厚中的用途，属于医学分子生物学领域。

背景技术

左心室肥厚(left ventricular hypertrophy，LVH)是高血压的主要直接并发症。据调查，在我国农村4270例高血压患者中，有心脏肥厚者占42.8％。左心室肥厚被公认为心衰的前期病变，是心衰、脑中风、冠心病和猝死的重要独立危险因素。研究表明，左室肥厚易导致心脏内血液淤滞，易引起房颤等心律失常，促进血栓形成，使缺血性脑卒中的发生危险增加2.5倍。此外，左心室肥厚使心血管疾病的总发生率平均增加2.3倍，使高血压患者及总体人群的总死亡率平均增加2.5倍。因此，控制心肌肥厚可以减少脑中风、冠心病、心衰及死亡。这对延长我国人民寿命，提高生活质量，节省医疗资源具有极为重要的意义。

虽然高血压是心脏肥厚最重要的危险因素，但是其他多种因素，如年龄、性别、生活方式、肥胖程度、药物治疗、糖尿病以及遗传因素等，都会对左室重量有影响。其中，血压水平对左室重量的影响约占25％，而遗传因素对左心室重量的影响约占所有非血压因素的60％。将左心室肥厚作为多种疾病的中间表型，寻找其中的致病基因，从分子水平揭示高血压引发的靶器官损伤的复杂发病机理，可为及早发现左心室肥厚的危险人群、干预左心室肥厚发生和发展提供有利手段。

内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)是心肌肥厚和心肌重构过程中的关键调控基因。该基因位于第7号染色体长臂(7q35-7q36)上，全长约为21kb，由26个外显子和25个内含子组成，编码mRNA长度为4052nt，表达产物为135kDa。eNOS是内皮细胞合成NO的关键酶，其表达增加可改善心肌功能失调，抑制心肌梗死后心肌的纤维化，抑制β肾上腺素能刺激引起的肥厚效应，减轻异丙肾上腺素缓慢注射引起的心脏重量(HW)、心脏重量/体重比(HW/BW)增加，同时还减少心肌肥厚时心钠素(ANP)mRNA的表达。心肌细胞特异高表达eNOS可以显著抑制心梗引起的左室代偿性肥厚。与此相反，eNOS(-/-)大鼠在压力后负荷升高刺激后，左室出现非扩张性向心性肥厚，其收缩、舒张功能受损，呈现间质纤维化。鉴于内皮型一氧化氮合酶对心肌重构的显著抑制功能，我们采用功能候选基因策略，研究了该基因的基因多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)对高血压继发左心室肥厚的影响。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，提供一种根据内皮型一氧化氮合酶基因多态位点预测高血压继发左心室肥厚的方法。

本发明要解决的另一个技术问题是，提供一种根据内皮型一氧化氮合酶基因多态位点预测高血压继发左心室肥厚的临床检测试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

以eNOS为功能候选基因，在河南省信阳市农村社区原发性高血压人群中研究eNOS的基因单核苷酸多态性对高血压继发左心室肥厚的影响。我们发现，一个位于eNOS第七外显子区的标签SNP(tagSNP)rs1799983与原发性高血压的左心室肥厚发生及肥厚程度紧密相关。据此结果，我们建立了一个预测高血压继发左心室肥厚的试剂盒，并在山东省日照市的另一个独立的高血压人群中对该试剂盒的预测作用进行了验证，结果表明，该试剂盒预测效果显著，结果准确。

本发明的重要意义：心肌肥厚是所有心脑疾病发生的独立危险因素，也是一个可以控制的因素。eNOS的基因多态性对高血压继发心肌肥厚的程度有良好的预测性，这就为高血压患者的个性化诊断提供了指导，为预后判断提供了重要参考，也为高血压继发左心室肥厚的治疗提供了潜在的药物干预靶位点。

一种预测高血压继发左室肥厚的检测引物，具有序列表SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2所示的核苷酸序列。

一种预测高血压继发左室肥厚的试剂盒，成分和含量如下(50人份)，于-20℃保存：

50μL 10×PCR缓冲液(TaKaRa)，

50μL 10mmol/L dNTP混合液(TaKaRa)，

12μL(5U/uL)Taq DNA聚合酶(TaKaRa)，

各20μL(10umol/L)SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2引物(北京奥科生物公司)

5ml去离子双蒸水(ddH2O)，