[发明专利]铁测定试剂组合、试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及铁浓度分析领域，更具体地，本发明涉及用于测定含有转铁蛋白的生物样品中的铁浓度的试剂组合、包含其的试剂盒及其应用。

背景技术

人体内总铁含量为4克左右，其中三分之二的铁存在于血红蛋白中，余下三分之一存在于肝、脾、骨髓等组织中。血清中总铁含量为3-4毫克，存在形式为与转铁蛋白相结合，血清中铁的浓度通过红细胞产生或降解的速度来调节，血清中铁的含量反应了人体造血器官的功能。另外，体内铁存储量的动态也影响血清中铁的浓度，例如肝炎时，铁从肝细胞转移到其它组织，使血清铁浓度增高。血清铁浓度增高或降低不仅能反映造血功能疾病(缺铁性贫血、再生障碍性贫血、恶性贫血、溶血性贫血、白血病和红细胞增多症等)，而且能反映其它系统的疾病(例如感染性疾病、急性肝炎、肝硬化、血色病和肾病等)，因此血清中铁浓度的测定是临床上一项重要的检查项目。血清铁的正常参考值为男性：11～30μmol/L(60～170μg/dl)，女性9～27μmol/L(50～150μg/dl)。

本发明为配合生化分析仪使用的，临床上测定血清中铁浓度的试剂。

目前市场上出售的血清铁试剂多是采用比色法，其原理为：血清样品与试剂组分中的变性剂反应，将与转铁蛋白结合的铁释放出来，成为游离铁，游离的三价铁离子与还原剂反应，还原为二价铁。然后与二价铁离子络合的显色剂反应，产生吸光物质，可进行比色测定。反应方程式为：

Fe²⁺+显色剂→光吸收复合物

显色剂一般使用含-N＝C-C＝N-结构的生色原(如铬天青、菲罗啉和亚铁嗪等)，与亚铁离子形成五元环，产生紫红色。在第一步即释放出游离铁的反应中，通常使用的缓冲液包括乙酸缓冲液、草酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、磷酸钾缓冲液和琥珀酸缓冲液等，缓冲液的pH值范围为2-4，缓冲液浓度范围为10-500mM。还原剂通常使用抗坏血酸、半胱氨酸、巯基乙酸、二硫苏糖醇、β-巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等，浓度范围在0.1-500mM。

现有技术中存在的一种血清铁试剂包括以下各项：

R1干粉：抗坏血酸57mmol/L

R1液体：甘氨酸缓冲液(pH3.1)0.4mol/L，盐酸胍，防腐剂(叠氮钠)

R2液体：亚铁嗪5.0mmol/L

然而该血清铁试剂存在以下缺点：

(1)该血清铁试剂使用的还原剂是抗坏血酸，而抗坏血酸在溶液中极不稳定，其水溶液在室温下放置24小时即会被氧化成黄色，因此在试剂盒中只能配制成干粉的型式。这样在检测时需先用R1液体溶解R1干粉，配成R1工作液后再使用，操作步骤繁琐。且R1干粉在分装时，易产生瓶间差，导致测定结果重复性差；

(2)其中使用的防腐剂叠氮钠的毒性非常大，它阻断细胞色素电子运送系统。叠氮钠可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。大批量生产时使用大量叠氮钠，如果不经过严密防护会对工人身体产生伤害。另外，叠氮钠与酸性溶液反应会放出有毒气体，测定时操作者打开试剂瓶盖时可能会吸入有毒气体；

(3)其中使用甘氨酸作为酸性缓冲液，其酸性较弱，盐酸胍在其中的变性能力不强，因此试剂盒最低检出浓度高，灵敏度低。

US6274382B1公开了一种用于测定生物样品中铁浓度的组合试剂，其中特别添加金属阳离子(铟或钪)用于防止EDTA对测定的干扰。该文献并没有公开或启示在检测试剂中添加表面活性剂对于测定的灵敏度和测定的线性范围的影响。

发明内容

本发明所要解决的技术问题：

现有的技术方法中还原剂多使用的是抗坏血酸，而抗坏血酸在溶液中极不稳定，其水溶液在室温下放置24小时即会被氧化成黄色，因此在试剂盒中只能配制成干粉的型式。这样在检测时需先用R1液体溶解R1干粉，配成R1工作液后再使用，操作步骤繁琐。

解决现有技术方法中防腐剂叠氮钠对人体造成伤害的问题。

解决现有技术方法检测灵敏度不高的问题。

本发明采用的技术方案：

因此，本发明的一个目的是提供一种用于测定含有转铁蛋白的生物样品中的铁浓度的试剂组合，所述试剂组合包括：

(i)第一试剂，其包含缓冲剂和用于释放与所述转铁蛋白结合的铁的试剂；

(ii)第二试剂，其包含铁的还原剂和适于与还原铁形成有色复合物的着色剂；

其中所述第一试剂还含有表面活性剂。