[发明专利]板栗的组织培养方法及其专用培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种板栗的组织培养方法及其专用培养基。

背景技术

板栗是一种重要的经济作物，全身是宝，例如，板栗果实具有重要的营养价值，可加工成多种食品；板栗树材质坚硬，纹理通直，防腐耐湿，是制造军工、车船、家具等良好材料；其枝叶、树皮、刺苞富含单宁，可提取烤胶；花可作为是很好的蜜源等等。正是由于板栗具有诸多重要的应用价值，市场需求大，所以人们越来越注重其优良品种的培育。尤其是在20世纪初，美国发生的栗疫病(Cryphonectriaparasitica(Murr.)Barr)，引起了前所未有的大面积生态环境灾害，几乎毁灭了美国东部所有天然的栗树林，此后，育种学家们更加注重培育抗疫病性的板栗新品种。

离体培养技术作为现代育种技术的基础和良种繁育的重要手段，受到了极大地青睐。栗属树种离体培养最早是Jacquiot开始尝试的，1971年，Borrot完成了对茎形成层的研究，以成熟板栗树(100年以上)的形成层做外植体，经过离体培养形成愈伤组织，随后在Trippi等人的研究中，也只获得了愈伤组织(callus tissue)，而未见器官分化或只分化到“类芽组织”或芽原基。

中国板栗(Castanea mollissima BL.)具有抗疫病性(blight-resistance)和抗黑水病(inkdisease)的优良特性，是一种良好的种质资源。但是中国板栗极难生根，扦插繁殖生根率很低，而在生物技术方面的研究很少，还未见中国板栗成年树无菌培养体系的成功报道。其有关组培技术的欠缺极大地束缚了现代生物技术在板栗的科研、生产中的应用与发展。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于培养板栗的培养基。

本发明所提供的板栗培养基，是在WPM培养基中添加包括IBA和下述两种激素中的至少一种得到的培养基：KT和TDZ；所述IBA的终浓度为0.1-1.0mg/L，所述KT或TDZ的终浓度为0.5-1.0mg/L。

为了防止内生菌的产生，所述培养基还可以包括终浓度为250-500mg/L的头孢霉素。

为了防止褐化，所述培养基还可包括终浓度为3-5g/L的活性炭。

其中，所述IBA的终浓度优选为0.1mg/L，所述KT或TDZ的终浓度优选为1.0mg/L，所述头孢霉素的终浓度优选为250mg/L，所述活性炭的终浓度优选为4g/L。

本发明的另一个目的是提供一种组织培养板栗的方法。

本发明所提供的组织培养板栗的方法，包括如下步骤：以板栗带腋芽的茎段为外植体，利用上述任一所述培养基进行组织培养，得到板栗组培苗。

所述培养的条件可以为：温度为23±2℃、相对湿度为50-60％、光强为2000-2500Lx、光照明暗周期为14小时光照/10小时黑暗。

所述茎段取自板栗成年树的春季新生枝条。

为了改变外植体材料表面所携带真菌及细菌的正常生活温度，在杀菌前使其生理代谢产生紊乱，从而增加外植体的成活率，而又能保证新生枝条维持正常的生命代谢，所述新生枝条在所述初代培养前最好先在4℃条件下保存24h。

上述培养基及培养方法适合于一般板栗的培养，如中国板栗，具体可以为中国板栗燕红。

本发明培养基筛选出了适合中国板栗生长的激素种类、抗生素种类、防褐化物质等，解决了目前中国板栗培养中存在的污染和褐化问题，成功建立了中国板栗成年树的无菌培养体系。用本发明培养基培养板栗的方法，成功筛选出了建立中国板栗成年树无菌培养体系的外植体材料——板栗成年树春季枝条，保证了优良性状的遗传稳定性，完善了杀菌处理方法，还具有操作简单、成本低廉。因此，本发明培养基及板栗培养方法适合于推广应用。

附图说明

图1为中国板栗燕红初代培养的生长情况。

图2为中国板栗燕红的继代培养的生长状况。

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。

实施例中用到的试剂及基本培养基如下：

琼脂、蔗糖、活性炭、滤纸、封口膜、75％乙醇、95％乙醇、硝酸铵、硝酸钙、硫酸钾、氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、硼酸、乙二胺四乙酸钠铁、甘氨酸、肌醇、Ph试纸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、核黄素均购自北京广达恒益科技有限公司。

3-吲哚丁酸(IBA)、6-糠氨基嘌呤(KT)、噻苯隆(TDZ)、头孢霉素均购自北京华夏康源科技有限公司。

升汞购自上海开通化工有限公司。