[发明专利]一种检测炔诺酮的方法及其专用酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测炔诺酮的方法及其专用酶联免疫试剂盒。

背景技术

炔诺酮是一种甾类同化激素，其结构式如图1所示，被大量用于促进反刍动物 的生长。但是，研究表明炔诺酮有明显的致癌性，人食用了含有这类药物的畜禽产 品也容易被致癌。欧美等国家已相继禁止或严格禁止使用炔诺酮。我国农业部第235 号文件中规定，动物源性食品中炔诺酮的残留限量为不得检出。因此，在实践中， 需要一种精确度、灵敏度高的检测炔诺酮方法。

目前，动物组织中炔诺酮残留量的常规检测方法主要有液相色谱/质谱法 (LC/MS)、高效液相色谱(HPLC)等，但是这些方法存在着仪器设备复杂、检测 过程繁琐和对检验人员的技能要求高的缺点，不适合现场监控和大量样本的筛查， 推广应用受到限制。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测炔诺酮的酶联免疫试剂盒。

本发明所提供的检测炔诺酮的酶联免疫试剂盒，包括炔诺酮半抗原和炔诺酮的 特异性抗体；所述特异性抗体为所述炔诺酮的多克隆抗体或单克隆抗体；所述炔诺 酮半抗原的结构式如下：

其中，所述炔诺酮半抗原和炔诺酮的特异性抗体可以以下述任一种形式存在：

1)将所述炔诺酮半抗原与载体蛋白进行偶联，得到炔诺酮半抗原与载体蛋白 的偶联物，将其作为包被原，所述特异性抗体进行酶标记后作为酶标记物；

2)所述特异性抗体为包被原，所述炔诺酮半抗原进行酶标记后作为酶标记物。

所述试剂盒还可以既包括炔诺酮半抗原和炔诺酮的特异性抗体又包括抗抗体； 所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体；

其中，所述炔诺酮半抗原和抗抗体可以以下述任一种形式存在：

1)将所述炔诺酮半抗原与载体蛋白进行偶联，得到炔诺酮半抗原与载体蛋白 的偶联物，将其作为包被原，所述抗抗体进行酶标记后作为酶标记物；

2)所述抗抗体为包被原，所述炔诺酮半抗原进行酶标记后作为酶标记物。

所述炔诺酮多克隆抗体或炔诺酮单克隆抗体，均是以炔诺酮半抗原与载体蛋白 的偶联物作为免疫原得到的；所述载体蛋白可为甲状腺蛋白、牛血清蛋白、鼠血清 蛋白、人血清蛋白、兔血清蛋白、血蓝蛋白、纤维蛋白原或卵清蛋白等。

所述单克隆抗体是由保藏号为CGMCC2546的对炔诺酮药物的单克隆杂交瘤细 胞株C-2-3分泌产生的抗体。

所述炔诺酮多克隆抗体可为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源抗体。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还可包括炔诺酮标准品溶 液、显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液。

其中，所述浓缩洗涤液可为含有0.7％-1.4％吐温-80、0.02-0.05％硫柳汞防腐剂、 pH值为6.4-6.8、0.05-0.2mol/L磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液可为含有3-5％卵 清蛋白、pH值为6.5-7.2、0.1-0.2mol/L磷酸盐缓冲液；所述百分含量为质量百分 含量。

所述酶标记中所用的标记酶可为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶；当标记酶为 辣根过氧化物酶时，所述显色液由显色液A液和显色液B液组成，显色液A液可为 过氧化氢或过氧化脲，显色液B液可为邻苯二胺或四甲基联苯胺，终止液可为 1-2mol/L硫酸或盐酸溶液；当标记酶为碱性磷酸酯酶时，显色剂可为硝基磷酸盐缓 冲液，终止液可为1-2mol/L氢氧化钠溶液。

所述浓缩洗涤液具体可为含有1.0％吐温-80、0.03％硫柳汞防腐剂，pH值为6.8、 0.2mol/L的磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液具体可为含有4％卵清蛋白、pH值为6.8、 0.1mol/L的磷酸盐缓冲液；所述底物显色液A液为过氧化脲，所述底物显色液B液为 四甲基联苯胺；所述终止液为2mol/L的盐酸；所述百分含量为质量百分含量。

本发明中，在洗涤液中加入一定量吐温-80和硫柳汞的作用在于：吐温-80会减 少抗体的非特异性吸附，还能对蛋白起到一定的保护作用；则硫柳汞在溶液中能抑 制细菌的生长，对溶液的稳定性起到一个保护作用。