[发明专利]O型口蹄疫合成肽疫苗

权利要求书

1.一种用于O型口蹄疫合成肽疫苗的多肽，其中所述多肽为 SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述SEQ ID NO.1 所示的氨基酸序列的氨基酸序列中全部缬氨酸被正缬氨酸替代；和 全部亮氨酸被正亮氨酸替代。

3.一种口蹄疫合成肽疫苗，其中包括一种或多种选自权利要求 1或2所述的多肽。

4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含佐 剂。

5.一种根据权利要求1或2所述的多肽的制备方法，其中包括 以下步骤：

(1)以氨基树脂为起始原料，以9-芴甲氧羰基保护的氨基酸 为单体，按照所述氨基酸序列依次缩合接上氨基酸，每步缩合反应 后用乙酰咪唑封闭未反应的氨基端；

(2)合成完毕后加入裂解试剂裂解多肽；

(3)使用乙醚收集、沉淀多肽；

(4)超滤纯化多肽后进行无菌处理。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述裂解试 剂的组分体积比为三氟乙酸∶三异丙基硅烷∶苯酚∶H₂O＝85∶8∶6∶ 1。

7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，所述裂 解时间为1-4小时。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1) 包括以下步骤：

(a)脱保护反应：将氨基树脂置于体积百分比为15-30％的六 氢吡啶的N-甲基吡咯烷酮(NMP)溶液中，在20-28℃条件下反应 25-40分钟脱除氨基树脂上的9-芴甲氧羰基保护基团；

(b)洗涤：氮气吹干，N-甲基吡咯烷酮洗涤氨基树脂；

(c)缩合反应：加入1-羟基苯丙三唑(HOBT)、二环己基碳 二亚胺(DCC)与9-芴甲氧羰基保护的氨基酸在20-28℃条件下反 应0.5-2.5小时；

(d)洗涤：氮气吹干，N-甲基吡咯烷酮洗涤氨基树脂；

(e)封闭反应：加入重量体积百分比为1.5-4％的乙酰咪唑的 N-甲基吡咯烷酮(NMP)溶液，在20-28℃条件下反应20-40分钟。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4) 包括以下步骤：

(a)使用切向过滤膜包在20-28℃条件下超滤多肽抗原，除 去小分子杂质；

(b)使用0.2微米在线滤器除菌保存。

10.一种根据权利要求3或4所述的疫苗的制备方法，其中包 括以下步骤：

(1)用注射用水将权利要求1或2所述的多肽稀释到50μg/ml 制得抗原水相；

(2)将佐剂经121℃、30分钟灭菌备用；

(3)在20-28℃条件下，按照抗原水相与佐剂1∶1的体积比， 先将佐剂加入乳化罐内，90-150转/分钟慢速搅拌1.5-3分钟，缓慢 加入水相，加完后搅拌20-30分钟，再高速8000-10000转/分钟搅 拌15-30分钟，静置5分钟，分装后即得。

11.根据权利要求1或2所述的多肽在制备治疗和/或预防猪O 型口蹄疫的药物中的用途。

12.权利要求3或4所述的疫苗在制备治疗和/或预防猪O型口 蹄疫的药物中的用途。