[发明专利]用于西罗尼病毒检测的蛋白质芯片及其制备方法

权利要求书

1.一种检测西尼罗病毒的蛋白质芯片，是在生物芯片片基上固定有至少一种西 尼罗病毒蛋白抗原的生物芯片；

所述检测西尼罗病毒的蛋白质芯片的制备方法，包括如下步骤：

1)用含有甘油的碳酸盐缓冲液将抗原稀释至0.1-1.0mg/ml；所述碳酸盐缓冲液 中甘油的含量为30-70％；所述碳酸盐缓冲液的浓度为0.01-0.2mol/L，pH为9.0-10.0；

2)将稀释后的抗原固定于片基上；

3)用封闭液将完成步骤2)的片基进行封闭，得到所述蛋白质芯片；所述封闭液 为含有0.01-2％BSA和0.01-2％Tween 20的PBS溶液；所述PBS溶液的浓度为 0.001-0.2mol/L，pH为6.5-8.5；

所述西尼罗病毒蛋白抗原为：西尼罗病毒C蛋白、西尼罗病毒M蛋白、西尼罗病毒 prM蛋白和西尼罗病毒E蛋白。

2.如权利要求1所述的芯片，其特征在于：所述片基上还固定有质控对照；所 述质控对照为抗IgG抗体或抗IgM抗体。

3.如权利要求1或2所述的芯片，其特征在于：所述片基为玻璃片基、膜片基、 高分子硅片基或塑料片基。

4.一种制备西尼罗病毒检测蛋白质芯片的方法，包括如下步骤：

1)用含有甘油的碳酸盐缓冲液将抗原稀释至0.1-1.0mg/ml；所述碳酸盐缓冲液 中甘油的含量为30-70％；所述碳酸盐缓冲液的浓度为0.01-0.2mol/L，pH为9.0-10.0；

2)将稀释后的抗原固定于片基上；

3)用封闭液将完成步骤2)的片基进行封闭，得到所述蛋白质芯片；所述封闭液 为含有0.01-2％BSA和0.01-2％Tween 20的PBS溶液；所述PBS溶液的浓度为 0.001-0.2mol/L，pH为6.5-8.5；

所述西尼罗病毒蛋白抗原为：西尼罗病毒C蛋白、西尼罗病毒M蛋白、西尼罗病毒 prM蛋白和西尼罗病毒E蛋白。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中还包括将质控对照固 化于片基上的步骤；所述质控对照为抗IgG抗体或抗IgM抗体；所述片基为玻璃片基、 膜片基、高分子硅片基或塑料片基。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述西尼罗病毒E蛋白稀释后的浓度 为0.005-5.0mg/ml；所述西尼罗病毒prM蛋白稀释后的浓度为0.005-5.0mg/ml；所述 西尼罗病毒M蛋白稀释后的浓度为0.005-5.0mg/ml。

7.一种西尼罗病毒检测试剂盒，包括权利要求1至3中任一所述的蛋白质芯片。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括稀释液和洗涤液； 所述稀释液为含有0.01-2％BSA和0.05-1.0％NaN₃的磷酸缓冲液；所述洗涤液为含有 0.001-2％吐温-20和0.05-1.0％NaN₃的磷酸缓冲液。

9.如权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括用于显色 反应的试剂；所述显色反应为纳米金显色反应、磁珠显色反应、荧光显色反应或酶标 显色反应。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述显色反应为酶标显色反应， 所述用于显色反应的试剂为示踪物和显色剂；所述显色剂为四甲基联苯胺显色液；所 述示踪物为辣根过氧化酶标记的二抗；所述二抗为抗人IgG抗体或抗人IgM抗体。