[发明专利]一种肺癌DNA质粒疫苗及其制备方法无效
| 申请号： | 200810120856.7 | 申请日： | 2008-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN101361983A | 公开（公告）日： | 2009-02-11 |
| 发明（设计）人： | 龚朝辉;乐燕萍;龙香娥 | 申请（专利权）人： | 宁波大学 |
| 主分类号： | A61K48/00 | 分类号： | A61K48/00;A61P35/00;A61P11/00 |
| 代理公司： | 宁波奥圣专利代理事务所（普通合伙） | 代理人： | 程晓明 |
| 地址： | 315211浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肺癌 dna 质粒 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.一种肺癌DNA质粒疫苗的制备方法，其特征在于包括下述步骤：
1)根据特异性CTL识别的肺癌抗原MAGE-3的表位EVDPIGHLY和FLWGPRALY以及NY-ESO-1的表位SLLMWITQC和QLSLLMWIT，设计合成含有上述四个表位的融合基因MAGE-NY-ESO，并以柔性四肽GPGP连接各表位，融合基因MAGE-NY-ESO的大小为144bp；
2)以pNGVL4a质粒为载体，将上述融合基因亚克隆入CMV启动子下游，得到pNGVL-MAGE-NY-ESO质粒；
3)将PCR获得的大小为432bp的GM-CSF基因片段插入到上述pNGVL-MAGE-NY-ESO质粒的另一个CMV启动子下，得到pNGVL-GM-CSF-MAGE-NY-ESO质粒；
4)将上述pNGVL-GM-CSF-MAGE-NY-ESO质粒转入到感受态细胞E.coli TG1中，在37℃温度条件下的LB培养基中培养扩增，经过筛选和质粒抽提试剂盒抽提获得能治疗肺癌的DNA质粒疫苗pNGVL-GM-CSF-MAGE-NY-ESO。
2.如权利要求1所述的一种肺癌DNA质粒疫苗的制备方法，其特征在于将上述DNA质粒疫苗溶于磷酸盐缓冲液中，并以阳离子脂质体DOSPER为免疫佐剂，制备得到含有阳离子脂质体的DNA质粒疫苗，其中所述DNA质粒疫苗与阳离子脂质体的质量比为10∶1。
3.如权利要求1所述的制备方法得到的肺癌DNA质粒疫苗，包括质粒载体，其特征在于所述质粒载体中含有肺癌抗原MAGE-3和NY-ESO-1的四表位的融合基因MAGE-NY-ESO，所述融合基因MAGE-NY-ESO为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，所述质粒载体为pNGVL4a，所述质粒载体中还含有GM-CSF对应的全部基因序列，所述GM-CSF编码的氨基酸序列为Genebank no.AAA52578。
4.如权利要求3所述的肺癌DNA质粒疫苗，其特征在于所述融合基因MAGE-NY-ESO表达的蛋白质为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
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