[发明专利]一种高效液相色谱法测定维生素A含量的方法

说明书

技术领域

本发明属分析化学领域，涉及定量测定制剂中维生素A含量的方法，特别涉及一种用高效液相色谱法测定维生素A含量的相关技术。

背景技术

制剂中维生素A的含量测定方法常为紫外-可见分光光度法，中国药典2005版对其有详细的描述，该方法操作比较烦琐，且有适用范围，对某些制剂中的维生素A的含量还不能进行测定(干扰较大，方法不专一)。现公开的反相高效液相色谱法(流动相系甲醇：水为90-100：10-0)测定一些含维生素A的复方维生素固体制剂中的维生素A的含量测定时，专属性差，维生素A的峰与其他的杂质峰分离度只能达到1.4以下，难以达到中国药典的要求(分离度应大于1.5)。

发明内容

本发明旨在解决含维生素A的固体制剂，尤其是多维元素(例如多维元素片(21))中的维生素A的含量测定问题，这些制剂中的维生素A的含量测定无法使用中国药典所规定的测定方法。

具体方法技术方案如下：

一种高效液相色谱法测定维生素A含量的方法，其色谱条件为：

a、填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；

b、流动相为混合比例为80-90：20-10(但不包括90：10)的甲醇和水混合溶液；

c、紫外检测器的检测波长为325nm。

更进一步，该高效液相色谱法测定维生素A含量的方法，其色谱条件为：其所用流动相流速为1ml/min，进样体积为20μl。

本发明技术进步在于，方法简单，又能达到中国药典的要求。

本发明方法的建立过程：

1、仪器与试剂

仪器：Waters 2487检测器，Waters 1525泵，Breez色谱工作站，岛津SPA-10Avp检测器，LC-10ATvp泵，CLASS-VP色谱工作站

试剂：甲醇(色谱纯)   水(注射用)

2、含量测定方法的建立

2、1 波长的选择

维生素A紫外光吸收具有自身的特性。我们测定了它的异丙醇溶液在紫外下的吸收图谱，维生素A的检测波长选用325nm。

2、2 溶解性试验

我们将维生素A对照品在溶剂正己烷和二甲亚砜中的溶解性对比试验，结果为：维生素A均在正己烷中易溶，而在二甲亚砜中溶解，表明：维生素A在正己烷中的溶解性能优于二甲亚砜。

2、3 溶剂的干扰性试验

我们将维生素A含量测定中的提取前的二甲亚砜上清液及用正己烷提取浓缩加异丙醇溶解后的测试溶液进行测试比较，以此来选择所需的溶剂。

方法如下：取制剂，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于维生素A7500IU)，置50ml量瓶中，加二甲亚砜20ml，在50℃超声助溶20分钟，取出，冷至室温，离心分离10分钟(3000转/分)。取上清液1ml作供试品溶液(1)；另精密移取上清液15ml，置50ml比色管中，加入正己烷20ml，静置使分层，用长胶头滴管吸取正己烷层至100ml量瓶中，再分别用20ml提取三次，合并提取液，加正己烷至刻度，混匀。取2ml，氮气流下吹干，加入异丙醇25ml，充分溶解，混匀，作为测定维生素A供试品溶液(2)。

分别在各自的色谱条件下，取供试品溶液(1)和(2)各20μl，注入色谱仪，记录色谱图。

结果显示：直接将提取前的二甲亚砜上清液进样时，对维生素A的含量测定干扰较用正己烷提取浓缩加异丙醇溶解后的测试溶液要大(而且对色谱柱伤害较大：试验证明将此溶液连续进样二十几针后，柱效明显降低)。因此，我们采用对二甲亚砜上清液先用正己烷提取浓缩再加异丙醇溶解后再作为含量测定的供试品溶液。

2、4 提取程度试验

取正己烷提取前的二甲亚砜样品溶液和提取后的二甲亚砜样品溶液，在维生素A各自含量测定HPLC法条件下分别测定。

结果显示：提取后的二甲亚砜样品溶液的色谱图中，已看不到维生素A主峰，表明正己烷能对二甲亚砜样品溶液中的维生素A提取完全。

2、5 方法的专属性

破坏性(酸、碱、双氧水、热、光破坏)试验下的分离：取本含量测定所需的供试品的量置于酸(0.1mol/ml HCl)、碱(0.1mol/ml NaOH)、双氧水(10％)、热60℃、光(4000LμX)的条件下破坏2小时(由于这些组分都是脂溶性的维生素，本身对空气、热、光也比较敏感。在操作的过程中就会发生降解)。结果表明本制剂在这些条件下均有降解峰产生，且它们与主峰、主峰与主峰之间均能达到良好的分离。各成分色谱峰之间及它们与杂质色谱峰的分离也均良好，因此我们认为各自的含量测定方法具有良好的专属性。