[发明专利]5′核苷酸酶诊断试剂盒及5′核苷酸酶活性浓度测定方法

权利要求书

1.一种利用酶比色法及酶联法技术的5’核苷酸酶活性浓度测定方法，其方法原理如下：

核苷单磷酸+水  5′核苷酸酶  核苷+磷酸根

磷酸根+腺苷二磷酸+草酰乙酸  丙酮酸羧化酶  腺苷三磷酸+

                                     丙酮酸+二氧化碳

二氧化碳+还原型辅酶  甲醛脱氢酶  甲酸+辅酶

核苷可以是腺苷、肌苷、尿苷。

将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的速度，测算出5’核苷酸酶的活性浓度大小结果。

2.一种5’核苷酸酶诊断试剂盒，主要成分包括：

缓冲液            20——500mmol/L

稳定剂            1——4000mmol/L

还原型辅酶        0.1——0.35mmol/L

丙酮酸羧化酶      1000——80000U/L

甲醛脱氢酶        1000——80000U/L

核苷单磷酸        1——50mmol/L

腺苷二磷酸        1——50mmol/L

草酰乙酸          1——50mmol/L

试剂成分的浓度不一定只限于上述范围；在此范围内效果较好，在此范围外，试剂仍会反应作用。

其特征在于：试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

3.根据权利要求2所述5’核苷酸酶诊断试剂盒，其特征在于：由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、丙酮酸羧化酶、甲醛脱氢酶、核苷单磷酸、腺苷二磷酸、草酰乙酸组成单剂试剂。

4.根据权利要求2所述5’核苷酸酶诊断试剂盒，其特征在于：由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、丙酮酸羧化酶、甲醛脱氢酶、核苷单磷酸、腺苷二磷酸、草酰乙酸组成双剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、核苷单磷酸、腺苷二磷酸、草酰乙酸组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、丙酮酸羧化酶、甲醛脱氢酶组成。还原型辅酶、丙酮酸羧化酶、甲醛脱氢酶、核苷单磷酸、腺苷二磷酸、草酰乙酸在试剂1或试剂2中的位置可以不限。

5.根据权利要求2所述5’核苷酸酶诊断试剂盒，其特征在于：由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、丙酮酸羧化酶、甲醛脱氢酶、核苷单磷酸、腺苷二磷酸、草酰乙酸组成多剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、核苷单磷酸、腺苷二磷酸、草酰乙酸组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、甲醛脱氢酶组成；试剂3，由缓冲液、稳定剂、丙酮酸羧化酶组成。还原型辅酶、丙酮酸羧化酶、甲醛脱氢酶、核苷单磷酸、腺苷二磷酸、草酰乙酸在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。

6.根据权利要求2所述5’核苷酸酶诊断试剂盒，其特征在于：还包括稳定剂1-4000mmol/L或0.1％-100％体积比。所述稳定剂为：硫酸铵(AmmoniaSulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene Glycol)、乙二醇(Ethyleneglycol)及防腐剂中的至少一种。