[发明专利]不结球白菜高Vc含量基因的分子标记方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及不结球白菜高Vc含量基因的分子标记方法，属于分子生物学领域，涉及不结球白菜高Vc含量系的分子育种，专用于不结球白菜高Vc含量品种的筛选和鉴定。 

二、背景技术

不结球白菜(Brassica campestris.ssp.chinensis.Makino)又名小白菜、青菜、油菜，是我国长江中下游及其以南地区的一种四季栽培的蔬菜，近年来在我国北方也有较大面积的引种栽培和推广。近年来，人们对蔬菜品质的要求越来越高，而Vc是品质性状中的重要指标，因此，高Vc含量成为不结球白菜的重要育种目标。 

张增翠等采用主基因-多基因混合遗传模型分析方法，对不结球白菜常州乌塌菜×矮脚黄、雪克青×矮脚黄两个组合的Vc、可溶性糖含量进行单世代和联合世代遗传分析。结果表明，两组合中Vc含量遗传符合一个主基因和多基因的混合遗传模型，主基因遗传率为52.68％～74.12％。Rousseaux和Sxhauer发现了番茄中控制果实Vc含量的QTL(Rousseaux et al.，2005；Schauer et al.，2006)。 

RAPD标记已广泛应用于遗传图谱构建、品种指纹图谱绘制、品种纯度检测及目标性状分子标记筛选等领域。本发明采用BSA方法和RAPD技术，筛选与不结球白菜高Vc含量基因紧密连锁的标记，以实现不结球白菜高Vc含量性状的标记辅助育种，加速我国不结球白菜高Vc含量品种的选育进程。 

三、发明内容

技术问题本发明的目的是：筛选出一个或几个与不结球白菜高Vc含量基因紧密连锁的分子标记，这些分子标记用于不结球白菜辅助选择育种和品种鉴定，可大大提高不结球白菜高Vc含量品种的选择鉴定效率。 

技术方案本发明的实施方案如下： 

不结球白菜高Vc含量基因的分子标记方法，其特征在于 

用RAPD标记引物AW5：CTGCTTCGAG 

扩增不结球白菜DNA，如果能够扩出561bp的片段AW5561，则标志着不结球白菜高Vc含量基因的存在； 

或者用SCAR标记引物SCAW5532 

F：TTCGAGGCTGAAGAG 

R：TTTCGCGTCTACTAATGC 

扩增不结球白菜DNA，如果能够扩出532bp的片段SCAW5532，则标志着不结球白菜高Vc含量基因的存在。 

有益效果：本发明选用的是不结球白菜高Vc含量品种常州乌塌菜和低Vc含量品种二青为材料开展不结球白菜高Vc含量基因分子标记的筛选。与目前技术相比，其优点是： 

(1)RAPD操作简便、快速、方便，它可以直接对生物基因组DNA多态性进行分析，RAPD引物的设计是随机的，因而无须知道特异位点序列的信息。 

(2)SCAR将退火温度提高到50～60℃，既克服了RAPD的不稳定性，又具有简单、实用、成本低的优点。 

(3)辅助选择方便，节约成本。不结球白菜高Vc含量品种的常规选育方法周期长，成本高，费时又费力。通过本发明筛选出的与不结球白菜高Vc含量基因紧密连锁的分子标记用于辅助选择，可以实现苗期选择，减少工作量，大大提高不结球白菜高Vc含量系的选择效率，从而加快育种进程。 

(4)本发明提供的分子标记，生产上可用于对不结球白菜高Vc含量品种的纯度鉴定。 

四、附图说明

图1父母本及F₁、F₂代DNA的提取 

泳道1～3分别为W、Q、F₁，泳道4-6为F₂单株。 

图2高、低Vc含量基因池、亲本的多态性筛选 

M为DL2000marker，→代表高、低池间的差异条带。 

图3特异引物的扩增结果 

M为DL2000marker，W为母本，Q为父本，H为高Vc含量基因池L为低Vc含量基因池。 

图4连锁标记对高、低Vc含量基因池，父母本，F₂代单株的扩增结果 

M为DL2000marker，W为母本，Q为父本，H为高Vc含量基因池，L为低 Vc含量基因池。1-6为高Vc含量单株，8-13为低Vc含量单株。