[发明专利]水产品中七种合成抗菌剂残留量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种同时检测水产品中七种合成抗菌剂残留量的检测技术。

背景技术

水产品药物残留主要是由于水产养殖过程中，为防病、治病而使用药物后蓄积和贮存在水产品任何食用部分所含药物的原药、代谢产物以及相关杂质的残留，其还包括药物在生态环境中的残留和在其他水生动植物体内的残留。水产品中主要残留药物有抗生素类、磺胺类、呋喃类、喹诺酮类以及某些激素等。但由于分析样品用药历史的未知性即污染源的未知性和样品种类的多样性，确定一个食品的安全性往往因为不同的检测指标物而需要进行多次检测，既耗费大量的人力物力，也大大拉长了检测周期。检测出的不合格产品由于检测时间较长，可能已经流入市场，成为了消费者的腹中之物。

目前国内在检测化学药物残留的测试方法中，它们都只能检测水体、沉积物以及其它环境材料中的某一种或某一类药物。对于测定鱼类组织中兽药残留的检测基本上都是单检测方法，而对于不同种类的合成抗菌剂残留的同时检测，我国还处于空白阶段。该方法能够快速、灵敏、准确的测定多种目标化合物，大大降低检测成本和缩短检测时间。

发明内容

1、要解决的技术问题

本测定方法是利用高效液相色谱法同时测定水产品中七种合成抗菌剂残留，主要包括：磺胺嘧啶(sulfadiazine、SD)、磺胺甲基嘧啶(sulfamerazine、SMR)、磺胺二甲基嘧啶(sulfadimidine、SDD)、磺胺二甲氧嘧啶(sulfadimethoxine、SDM)、呋喃唑酮(furazolidone、FZD)、噁喹酸(oxolinic acid、OXA)和萘啶酸(nalidixic acid、NAA)等多种合成抗菌剂。

2、技术方案

①提取

称取5g样品(精确至0.01g)置于50mL离心管中，加入20mL乙腈，10g无水硫酸钠，涡旋振荡5min，以10000r/min离心10min，上清液转移至125mL分液漏斗中。残渣中加入20mL乙腈，按上述方法再提取一次，上清液合并于分液漏斗中。

②脱脂

在分液漏斗中，加入30mL正己烷，加塞剧烈振荡5min，充分静置分液，收集乙腈层(下层)于250mL旋转蒸发瓶中，加入5mL正丙醇，40℃水浴条件下减压旋转蒸发至干。

③净化

中性氧化铝柱净化

当测定磺胺类和呋喃唑酮药物时，旋转蒸发瓶中的残渣用乙腈水溶液(95+5)5mL溶解，中性氧化铝固相萃取柱临用前用乙腈水溶液(95+5)10mL预洗并活化。旋转蒸发瓶内试样稀释液过柱，收集稀释液于150mL旋转蒸发瓶中，再用乙腈水溶液(95+5)5mL清洗旋转蒸发瓶一次，稀释液过柱一并收集于150mL旋转蒸发瓶中。于40℃水浴条件下减压旋转蒸发至干。往旋转蒸发瓶中加入1mL乙腈水溶液(4+6)溶解残渣，再加入2mL正己烷，混合1min，转移至10mL离心管中，4000r/min离心10min，将乙腈-水层(下层)过0.45μm微孔滤膜过膜，滤液作HPLC分析。

C₁₈柱净化

当测定噁喹酸和萘啶酸药物时，旋转蒸发瓶中的残渣用5mL0.05mol/L磷酸二氢钠溶液溶解，C₁₈固相萃取柱先后用10mL甲醇和10mL0.05mol/L磷酸二氢钠溶液预洗并活化，弃掉洗涤液。旋转蒸发瓶内试样稀释液过柱，再用5mL0.05mol/L磷酸二氢钠溶液清洗旋转蒸发瓶一次过柱，弃掉流出液。用10mL0.05mol/L磷酸二氢钠溶液清洗C₁₈柱，弃掉流出液。用10mL甲醇洗脱，将洗脱液收集至150mL旋转蒸发瓶中，于40℃水浴条件下减压旋转蒸发至干。往旋转蒸发瓶中加入1mL乙腈水溶液(4+6)溶解残渣，再加入2mL正己烷，混合1min，转移至10mL离心管中，4000r/min离心10min，将乙腈-水层(下层)过0.45μm微孔滤膜过膜，滤液作HPLC。

④测定条件

a)色谱柱：Symmetry C₁₈柱(250mm×4.6mm，5μm)

b)流动相：乙腈+0.08mol/L乙酸，梯度洗脱程序见表2；

c)流速：1.0mL/min；

d)柱温：35℃；

e)进样量：20μL；

f)检测波长：265nm

3、有益效果