[发明专利]一种AMACR自身抗体的检测方法及在前列腺癌诊断中的应用

说明书

技术领域

一种AMACR自身抗体的检测方法及在前列腺癌诊断中的应用，本发明涉及体外免疫检测领域。

背景技术

统计数据表明，美国男性每年有179,000人被诊断为前列腺癌，死亡率大约是25％。我国每年新增前列腺癌的病例为70,000-80,000人。晚期前列腺癌的死亡率很高，但如果发现得早，前列腺癌病人可以获得很高的五年生存率。因而，对前列腺癌的早期诊断十分重要。传统前列腺癌的诊断依靠病理学检查，需取活体组织，给病人带来痛苦和不便。PSA(前列腺特异性抗原)是仅发现于男性前列腺的一种蛋白酶。目前，血液中PSA浓度作为前列腺癌的重要指标。但是它的灵敏度和特异性都很低，不能作为大规模诊断普查之用。所以，新的肿瘤标志物的研究一直是肿瘤研究的重要领域。[参考文献：马乐、吴小晶、冉俊；前列腺癌肿瘤标记物研究的历史、现状和发展，中华检验医学杂志2001年7月第24卷第四期]

AMACR(α-甲基酰基辅酶A消旋酶)是最新研究发现的一种消旋酶，在前列腺癌组织中表达水平显著高于正常人，可以作为早期前列腺癌病变的诊断指标。AMACR的优点在于它是癌症特异性，只存在于癌症组织。AMACR亦可用作其他癌症，例如结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤等等的诊断标志物。以结肠直肠癌和前列腺癌表达最高。但是AMACR在血液中的浓度太低，不适合单独作前列腺癌标记物。最新的临床研究表明，AMACR引起血液中抗AMACR抗体的增加，前列腺癌病人血样中产生明显的抗AMACR自身抗体。如检测血液中抗AMACR抗体，检出前列腺癌的灵敏度是77％，特异性是80％(p＜0.001)，远远强于PSA作为前列腺癌的检测指标。[参考文献：Journalof the National Cancer Institute，Vol.96，No.11，June 2，2004]

发明内容

本发明的目的在于通过间接ELISA法检测人体内AMACR自身抗体来提供一种高灵敏、可大规模检查前列腺癌的方法。

本发明所说的AMACR自身抗体的检测是通过如下技术方案来实现的：

一种α-甲基酰基辅酶A消旋酶AMACR自身抗体的检测方法：

A、试剂的配制：

(1)0.05M、pH9.6包被缓冲液：1.59g Na₂CO₃、2.93g NaHCO₃，加超纯水定容至1000mL；

(2)0.15M、pH7.4磷酸盐缓冲液PBS：8.0g NaCl、0.2g KCl、2.9gNa₂HPO₄·12H₂O和0.2g KH₂PO₄，调pH至7.4后加超纯水定容至1000mL；

(3)0.15M，pH7.4磷酸盐-吐温缓冲液PBST：8.0g NaCl、0.2gKCl、2.9gNa₂HPO₄·12H₂O、0.2g KH₂PO₄和0.5mL Tween-20，调pH至7.4后加超纯水定容至1000mL；

(4)封闭液：1.0g明胶溶于100mL 0.15M、pH7.4磷酸盐缓冲液PBS中；

(5)0.05M、pH 5.6底物缓冲液：39.8g Na₂HPO₄·12H₂O、6.3g柠檬酸，加超纯水定容至1000mL；

(6)显色液：10mL pH5.6底物缓冲液、0.1mL 1％四甲基联苯胺(10mg四甲基联苯胺溶于1mL二甲基亚砜)和32μL0.75％H₂O₂，混合均匀，现用现配；

(7)终止液：2M H₂SO₄；

(8)阳性对照血清：取筛出的阳性血清OD₄₅₀≥0.500，按每mL血清加1000单位青霉素和1000单位链霉素，无菌过滤；

(9)阴性对照血清：取正常男性血清OD₄₅₀≤0.100，按每mL血清加1000单位青霉素和1000单位链霉素，无菌过滤；

所述的试剂的配制可按照实际需要按比例来配制；

B、AMACR自身抗体ELISA检测方法