[发明专利]一种在多孔硅胶上固定漆酶的方法

权利要求书

1.一种在多孔硅胶载体上固定化漆酶的方法，其特征在于：包括步骤如下

1)载体的制备

(a)多孔硅胶先用1摩尔/升的盐酸浸泡8-12小时，然后在60-80℃下烘干；

(b)称取所需的烘干后的硅胶置于三角瓶中，向其中加入体积比为1∶3的γ-氨丙基三乙氧 基硅烷和甲苯混合液，将三角瓶连入冷凝回流装置，氨基化8-12小时；

(c)将氨基化的硅胶依次用甲苯、蒸馏水和无水乙醇各清洗3-4次；

(d)将2.5％-5％质量分数的戊二醛水溶液与所需的氨基化硅胶充分混合，置于真空抽气装 置；

(e)在真空状态下超声反应30分钟；

(f)置于常温常压下静置30分钟；

(g)将嫁接上醛基的多孔硅胶载体低温干燥，即获得固定化用的多孔硅胶载体；

2)漆酶的固定化

(a)将步骤1)中得到的干燥多孔硅胶载体与溶于pH＝7.0磷酸缓冲溶液的漆酶充分混合， 置于垂直混合器上于4℃条件下固定12小时；

(b)用pH＝7.0磷酸缓冲溶液洗涤，并收集洗涤液，直到洗涤液中没有蛋白检出；

(c)将固定化好的漆酶放置在pH＝8.0乙醇胺-盐酸缓冲溶液中静置2小时；

(d)将静置后的固定化漆酶用pH＝7.0的磷酸缓冲溶液洗涤若干次，然后低温真空干燥制备 成固定化漆酶成品。

2.根据权利要求1中所述的方法，其中：步骤1)中多孔硅胶载体粒径为80-100目。

3.根据权利要求1中所述的方法，其中：多孔硅胶载体的孔径为10-50纳米。