[发明专利]乙型脑炎病毒E蛋白B细胞抗原表位多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗原表位多肽，尤其涉及乙型脑炎病毒E蛋白中和性B细胞抗原表位多肽，本发明还涉及该抗原表位多肽在防治和诊断乙型脑炎病毒中的应用，属于分子免疫学领域。

背景技术

流行性乙型脑炎乙型脑炎是由乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis virus，JEV)引起的一种重要蚊媒性人兽共患传染病。该病毒首先于1953年在日本从患者脑组织中分离获得，因此称日本脑炎病毒，所致疾病在日本称日本乙型脑炎。在我国最早于1940年分离此病毒，为了与甲型脑炎相区别，定名为流行性乙型脑炎，简称乙脑。在世界范围内每年有30,000-50,000例乙脑病例，约25％-30％死亡，50％导致永久性中枢神经系统后遗症。我国近年每年的乙脑病例大于5000例，死亡200例以上。对于流行性乙型脑炎病毒多种动物易感，但除人、马和猪外通常不呈现临床症状。对人主要引起中枢神经系统的急性感染，人感染临床上以高热、意识障碍、抽搐、呼吸衰竭及脑膜刺激征为特征。母猪感染可引起流产、产死胎或木乃伊胎，公猪感染导致睾丸肿大影响繁殖性能为特征，少数猪只感染可能呈现发热和神经症状，而其他猪则大多数不呈显症状。给养猪业造成巨大的经济损失。马属动物易感染，少数引起脑炎与神经症状，马是终末宿主。蚊是JEV的主要传播媒介，猪是该病毒在自然界中最重要的贮存与增殖宿主。乙型脑炎病毒主要在亚洲流行，而最近发现在南半球也有报道，这说明流行性乙型脑炎可能在世界范围内威胁着人类健康。

乙型脑炎病毒属黄病毒科，黄病毒属，为单链正链RNA病毒。基因组约11kb，包含一个大的开放阅读框架(ORF)，两端是5’端和3’端非编码区(UTR)。基因组5’端有帽子结构，但在3’端没有poly(A)尾。ORF编码含3432个氨基酸的前体蛋白，在病毒和宿主细胞蛋白酶的作用下加工为10个成熟蛋白，包含3个结构蛋白(C，prM，E)，7个非结构蛋白(NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A，NS4B，NS5)。病毒粒子呈球形，直径约30nm，有囊膜。JEV只有一个血清型，在抗原性上与西罗病毒、墨罗河谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒等属同一血清群，存在抗原交叉反应。病毒囊膜糖蛋白具有血凝特性，能凝集鹅、鸽、雏鸡等动物红细胞。病毒对热抵抗力弱，56℃30分钟或100℃2分钟即可灭活，但对低温和干燥的抵抗力很强。乙醚、1∶1000去氧胆酸钠以及常用消毒剂均可灭活病毒。在酸性条件下不稳定，适宜pH8.5～9.0。

采用疫苗进行预防接种是控制该病流行的有效措施。对乙型脑炎病毒抗原表位的研究是开发有效基因工程疫苗以及研究基于抗原表位的诊断检测试剂的理论基础。E蛋白是乙脑病毒粒子表面的一种重要的结构蛋白，是重要的免疫保护性抗原。在保护性抗原中具有中和作用的B细胞抗原表位在刺激机体产生中和性抗体中起得要作用。正确而详细地鉴定抗原表位对疾病的诊断、设计无毒副作用的人工疫苗以及免疫治疗剂等有重要的意义。

发明内容

本发明的目的之一提供乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位多肽。

本发明的目的之二是将所述的乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位多肽应用于治疗或预防乙型脑炎病毒，或者将其用于制备成诊断或检测乙型脑炎病毒的试剂。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位多肽，其氨基酸序列选自SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示的任意一种氨基酸序列。

其中，可以对所述的乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位的N端或C端进行化学修饰。所述的化学修饰为多肽链N端的自然氨基化或乙酰化，或C端的自然羧基化或酰胺化。

本发明中所述的乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位可以通过固相多肽合成方法合成得到，也可以通过基因工程技术制备得到，这些都为本领域人员所通晓。

本发明乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位或其连接物可用于制备免疫原，或将其免疫动物以产生免疫保护。也可将所述的乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位或其连接物制备成检测抗乙型脑炎病毒JEV抗体或抗乙型脑炎病毒JEV多肽抗体的试剂。