[发明专利]与肿瘤转移细胞特异性结合的多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程与生物医药技术领域，涉及利用噬菌体展示技术筛选能与肿瘤转移细胞表面抗原特异性结合的多肽，具体地说，是应用原位肿瘤和肿瘤转移细胞系差异筛选随机12肽噬菌体展示文库，得到可以用作肿瘤转移标志物的特异12肽序列。

背景技术

肿瘤细胞从原有部位侵入淋巴管、血管或体腔，迁徙到它处而继续生长，形成与原发瘤同样类型的肿瘤，称为转移[杨光华等《病理学》(第五版)，人民卫生出版社，2001年，P87)。

从分子水平发现肿瘤细胞表面各种分子的非正常表达，对于鉴别肿瘤的转移和发展有重要意义，VEGFR(血管内皮生长因子受体)在很多恶性癌细胞，如恶性肝癌细胞和头颈部扁平上皮癌细胞的表面高表达(邓靖宇，何生，等.VEGF在肝癌中的作用，世界华人消化杂志，2004，12(2)：454-458)；内源血凝集素在对肺部有高转移性的恶性肿瘤细胞表面含量较高[Raz A，Meromsky L，Lotan R，等.内源凝集素在正常细胞、肿瘤细胞和肿瘤转移细胞表面的差异表达，Cancer Research，1986年7月，46(7)：3667-3672]。这些细胞表面分子有可能作为肿瘤转移发生的标志物，在肿瘤诊断、判断预后、转归和评价疗效以及高危人群随访观察等方面，具有较大的实用价值。

现有噬菌体展示技术通常是对纯化了的蛋白进行筛选，得到与该蛋白特异结合的寡肽或抗体。在此基础上我们运用噬菌体展示技术对细胞表面抗原进行筛选，通过这种方法可以得到对细胞表面特异结合的寡肽分子。我们的方案克服了以往细胞筛选中的一些问题，主要是细胞表面成分复杂而且未知，细胞筛选的非特异性较大，背景值高，而且转移与非转移肿瘤细胞间细胞表面差异小。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的上述不足，提供一种与肿瘤转移细胞特异性结合的多肽及其应用。

因为完整细胞的表面有大量的糖类、蛋白等抗原成分与肿瘤转移相关，所以它们是潜在的肿瘤标志物。本发明应用原位肿瘤细胞和肿瘤转移细胞系，对噬菌体文库进行差异筛选，从而获得能与肿瘤转移细胞系特异性结合的12肽。

本发明应用SW480(原位肿瘤细胞系)和SW620(肿瘤转移细胞系)差异筛选噬菌体肽库，获得选择性地结合肿瘤转移细胞的12肽，其氨基酸序列如下：

Leu-Pro-Trp-Lys-Glu-Pro-Tyr-Tyr-Leu-Met-Pro-Pro。

在低转移细胞系MCF7(ATCC保藏号：HTB-22)和T47D(ATCC保藏号：HTB-133)，以及高转移细胞系MD-MB-231(ATCC保藏号：HTB-26)和MD-MB-435(ATCC保藏号：HTB-129)等4个细胞系中，证实了上述12肽与肿瘤的转移能力呈正相关。

本发明的有益效果是：本发明提供的12肽可以用作肿瘤转移诊断的标志物，并可作为开发抑制肿瘤转移药物的前体。

附图说明

图1.是噬菌体展示中各轮对SW620细胞特异性结合噬菌体的回收率，

图2.是经过四轮筛选得到的噬菌体以及原始库噬菌体与SW620和SW480细胞结合能力的比较，

图3.是105个噬菌体单克隆均与SW480和SW620细胞以及空白孔作ELISA检测，

图4.是测序后得到的表达四种多肽的噬菌体对SW480、SW620、MCF7、T47D、MD-MB-231和MD-MB-435的结合能力，

图5.是划痕试验检测12肽对肿瘤转移细胞SW620运动能力的影响。

具体实施方式

实施例1：经过四轮筛选获得能与SW620细胞表面选择性结合的重组噬菌体