[发明专利]一种隐性孔雀石绿金标检测试纸盒及其制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及水产类肉食品中药物的快速诊断用器具及其制备方法，属于生 物技术领域，具体为一种隐性孔雀石绿金标检测试纸盒及其制备方法。

(二)背景技术

隐性孔雀石绿(Leucomalachite green，LMG)是孔雀石绿(malachite green， MG)在生物体内主要代谢残留物，对人类有致癌危险。

孔雀石绿又称为苯胺绿、维多利亚绿或中国绿，是一种具有金属光泽的绿 色晶体，溶于水、乙醇和甲醇，水溶液的颜色为蓝绿色(最大吸收波长为618nm)， 最早在1913年有人发现孔雀石绿等染料可破坏病原菌而不引起宿主损害，从而 使这些染料用做防腐剂、杀锥虫药和其它医疗作用。自磺胺类药物和其它抗菌 素的出现，孔雀石绿作为抗菌素在畜牧业中的应用已日渐衰退。然而在水产养 殖中由于价格低廉和抗菌、抗真菌效果好，广泛用于进行水体消毒和防止鱼水 霉病。

近年来发现孔雀石绿特别是其代谢物在水产体内有明显的蓄积残留现象， 残留时间也较长。由于其化学官能团三苯甲烷是一种致癌物质，所以国外一些 发达国家，如欧盟、美国已宣布禁止其在经济鱼类(观赏鱼除外)养殖过程中 使用。我国农业部发布的《无公害食品中华绒鳌蟹》(NY5064-2001)和农业部 发布的《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》文件(农牧发[2002]1号)中 明确规定所有可食组织中禁用孔雀石绿。

《2000年度中国出口动物源性食品中有毒有害物质残留监控计划》首次将 鳗鱼中隐性孔雀石绿项目的监控列入年度计划，并延续至今。试验证实孔雀石 绿在动物体内8小时后50％转变为隐性孔雀石绿，24小时后84％转变成隐性孔 雀石绿，而长期滞留在组织中。国内外检测LMG主要采用以色谱技术(HPLC) 检测技术，虽然灵敏、定量准确，但大批量检测时速度慢，成本相对较高。以 金标检测试纸盒为代表的快速筛选法是免疫学主流技术，快速、成本低、可以 大批量检测，国内外尚无该技术报道。

(三)发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种隐性孔雀石绿金标检测试纸盒及其制备 方法，该检测试纸盒检测快速、准确、明显、灵敏度高，为此，本发明还提供 了该测试纸盒的制备方法。

一种隐性孔雀石绿金标检测试纸盒，其包括试纸条，所述试纸条被封装于 盒壳体，所述盒壳体上面开有注样孔，观测孔，其特征在于：所述试纸条用聚 氯乙烯或聚乙烯作背衬，在试纸条一端的注样区粘贴吸附含有胶体金-抗隐性孔 雀石绿单克隆抗体结合物的玻璃纤维膜；在试纸条中间的测试区粘贴硝酸纤维 素膜，玻璃纤维膜的一小段重叠在硝酸纤维素膜上，在试纸条另一端吸水区粘 贴吸水纸；在硝酸纤维素膜上从注样区到吸水区的方向，依次设置有材质为隐 性孔雀石绿-卵清白蛋白的检测线，和材质为羊抗鼠IgG质控线，所述硝酸纤维 素膜上覆盖有浓度为1％牛血清白蛋白层；所述注样孔对应于所述试纸条注样区 的玻璃纤维膜，所述观测孔对应于试纸条的测试区。

其进一步特征在于：所述硝酸纤维素膜厚度为120μm，蛋白质负载量为5μg /cm²～20μg/cm²，聚氯乙烯或聚乙烯背衬厚度为100μm，试纸条的尺寸为 (55～65)mm×(3～5)mm，检测线和质控线的宽度为0.5mm～1mm。

一种隐性孔雀石绿金标检测试纸盒的制备方法，其特征在于：其包括以下 步骤：

(1)隐性孔雀石绿金标检测试纸条的制备：将胶体金-抗隐性孔雀石绿单克 隆抗体结合物稀释至0.5μg/ml～2.0μg/ml，放入10mm×300mm玻璃纤维膜，浸 泡10分钟～20分钟，37℃烘干，4℃～8℃保存，粘贴在背衬一端的注样区；在 背衬中间检测区粘贴硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜上喷涂浓度为100μg/ mL～500μg/mL隐性孔雀石绿-卵清白蛋白作检测线，喷涂浓度为50μg/mL～ 200μg/mL羊抗鼠IgG作质控线，再用1％牛血清白蛋白封闭硝酸纤维素膜； 在背衬另一端吸水区粘贴吸水纸；

(2)所得隐性孔雀石绿金标检测试纸条包封在开有注样孔和观测孔的盒壳 体内，所述注样孔对应于所述试纸条注样区的玻璃纤维膜，所述观测孔对应于 试纸条的测试区。

其进一步特征在于：

胶体金的制备：