[发明专利]适合于大规模生产人用禽流感疫苗的裂解方法

权利要求书

1.本发明涉及一种规模化生产人用禽流感病毒裂解疫苗的病毒裂解方法，其特征在于，采用禽流感毒种NIBRG-14(05/160)重配高产株，以鸡胚作为基质细胞，规模化制备人用禽流感病毒裂解疫苗，其中包括：病毒接踵、病毒培养、病毒收获、粗滤尿囊液、连续流低速离心、超滤浓缩及蔗糖密度梯度离心、病毒裂解及再纯化。

2.权利要求1所述的在本发明方法中，采用的禽流感毒种为NIBRG-14(05/160)重配高产株，是由A/Vietnam/1194/2004(H5N1)毒株经重配获得，来自英国的NIBSC。

3.权利要求1所述的在本发明方法中使用鸡胚，病毒种子库为SPF鸡胚，生产用鸡胚为来源于封闭式房舍内饲养的、符合疫苗生产的海兰白或来亨健康鸡群。并选用9～11日龄无畸形、血管清晰、活动的健康鸡胚。

4.权利要求1所述的本发明中病毒培养方法为：

1)将禽流感病毒工作种子制备成1000-10000个EID50毒种悬液，于鸡胚尿囊腔接种，每胚0.1ml；

2)将鸡胚置33～35℃培育68～72小时；

3)挑选活胚置2～8℃经冷胚16～20小时，分组收获尿囊液。

5.权利要求1所述的本发明中病毒液合并与澄清方法其特征为：

1)将收获的病毒合并液用300目滤布过滤；

2)8000rpm连续流离心澄清。

6.权利要求1所述的在本发明中病毒液超滤浓缩方法其特征为：选用100～300KD超滤膜，将病毒合并液超滤浓缩30～50倍。

7.权利要求1所述的在本发明中病毒液纯化方法其特征为：将浓缩后的病毒液经蔗糖密度梯度30000rpm离心3小时。

8.权利要求1所述的本发明中病毒裂解方法其特征为：在纯化病毒液中按1∶4000加入聚山梨脂80，再按1∶1加入乙醚，在室温条件下磁力搅拌裂解病毒30分钟。裂解后进行再纯化，收集纯化病毒裂解液。

9.权利要求1所述的本发明中病毒纯化方法，其中病毒纯化液的收集采用紫外检测仪，收集纯化后的病毒。