[发明专利]伊文思蓝作为实体肿瘤着色剂的用途

说明书

技术领域

本发明涉及病理学、组织化学领域。具体地，本发明涉及伊文思蓝(Evans Blue，EB)这种水溶性染料的新用途。本发明通过合理选择伊文思蓝的施用剂量和作用时间，能够灵敏度高、选择性强地对肿瘤进行着色，由此提供了伊文思蓝作为实体肿瘤着色剂的新用途。

背景技术

伊文思蓝(Evans Blue，EB)是一种水溶性染料，  它的结构式如下所示：

通过结构式可知，伊文思蓝具有四个对称的磺酸基，能与蛋白表面亲核集团如赖氨酸、精氨酸或羟基发生磺化反应，与蛋白质间形成氨苯磺胺或磺酸酯链复合物。

伊文思蓝磺酸基与蛋白氨基结合反应式如下所示：

已知伊文思蓝是一种临床上广为应用的的实验诊断用药，它对人体没有任何毒性，被广泛用作血浆和血容量测定及血脑屏障、毛细血管通透性的研究研究中。其机理是在血液中，血浆白蛋白约占血浆总蛋白含量的60％，结构和立体构象赋予了血浆白蛋白结合其他物质的能力，如结合正常的代谢产物长链脂肪酸、类固醇等和外来的非生物物质如药物和染料等。伊文思蓝入血后迅速与白蛋白牢固结合，形成稳定的大分子复合物。文献报道伊文思蓝在血液中优先与白蛋白结合，当血浆中伊文思蓝与白蛋白摩尔比小于8时，伊文思蓝只与血浆白蛋白结合。

同时，本领域公知实体瘤组织血管系统与正常组织相比有很多不同。肿瘤直径达到2mm左右时，就诱导血管发生，形成新血管系统以满足不断增长的营养和氧需求，使血管密度增加。肿瘤血管形状构造不规则、血管壁膨胀缺失，血管内皮细胞排列不紧密、间隙大，文献报道人结肠腺癌血管孔径达400nm。正常组织中，血管平滑肌肉层在乙酰胆碱、NO等调节因子的作用下松弛或收缩以维持稳定的血流和血压；而肿瘤血管内皮细胞周围的平滑肌缺失使其丧失了自发调节功能而处于持久扩张状态，使血管渗漏增加。肿瘤血管内皮生长因子(VEGF/VPF)、缓激肽(BK)、NO、前列腺素(PGs)、基质金属蛋白酶(MMPs)等调节因子生成增多、交互作用加强，促使血管通透性增加。上述原因导致大分子物质可以透过血管壁进入肿瘤组织，在肿瘤组织滞留量增加；此外，肿瘤组织淋巴清除系统缺失，使需经淋巴系统清除的大分子药物和脂质等在肿瘤组织贮留时间延长，构成了大分子物质肿瘤被动靶向性的基础。这种大分子药物包括脂质体不能透过血管进入正常组织，但在肿瘤组织蓄积量增加、贮留时间延长的现象被称为EPR效应(Enhanced Permeability and  Retention)^[1]。实体瘤解剖学和病理生理学的改变是大分子化合物存在EPR效应的根本原因，有文献报道大分子在肿瘤组织滞留时间可以延长数周甚至数月。分子量大于40KDa(大于肾阈值)、血浆半衰期较长的大分子及大脂质体存在此效应。

申请人认为伊文思蓝本身用于人体是没有毒性的，而且其能够结合大分子白蛋白的物理特性和肿瘤组织中滞留大分子的时间长的EPR效应可以尝试将其作为肿瘤着色剂进行使用，又鉴于目前目前尚且没有将其用作肿瘤的着色剂的相关报道，设想将伊文思蓝作为肿瘤的着色剂。

在此设想的基础上，申请人采用合理的伊文思蓝用量，以伊文思蓝-白蛋白作为大分子模型，研究其在肿瘤组织的蓄积和滞留情况，结果观察到其在肿瘤组织内分布显著高于其它组织(P＜0.01)，肉眼可见瘤块和周围组织有明显的颜色差异。由此发现伊文思蓝制备用于肿瘤着色的肿瘤着色剂的新用途，由此完成了本发明。

发明内容

本发明涉及伊文思蓝在制备用于实体肿瘤着色的肿瘤着色剂中的用途。任选地，其中所述肿瘤源自哺乳动物。任选地，前述哺乳动物包括人、大鼠、小鼠、兔子、狗。任选地，该用途中，其中所述实体肿瘤类型包括肝癌、胃癌、乳腺癌、大肠癌、黑色素瘤、各种肉瘤、肺癌、头颈部癌、食管癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫癌、绒毛膜癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌等实体癌瘤。

附图说明：

图1表示伊文思蓝-甲酰胺溶液全波长扫描图。

图2表示伊文思蓝与白蛋白体内结合稳定性。

图3表示不同时间点伊文思蓝-白蛋白含量测定。

图4表示伊文思蓝-白蛋白大分子化合物在小鼠体内组织分布，其中，A为正常小鼠，B为S-180荷瘤小鼠，C为H22荷瘤小鼠。

图5表示EB-白蛋白大分子化合物在血浆与肿瘤组织分布，其中，A为S-180荷瘤小鼠，B为H22荷瘤小鼠。