[发明专利]一种基于OPF水凝胶为液态支架的可注射性心肌组织工程产品

权利要求书

1.一种以OPF水凝胶为载体的可注射性组织工程心肌产品的制备方法，步骤包 括：

(1)OPF的制备：

i.通过聚乙二醇(PEG)，富马酰氯和三乙胺(摩尔比1∶0.9∶0.9)一 步法反应制备，共沸蒸馏后，PEG被溶于二氯甲烷且富马酰氯和三 乙胺在几个小时中被逐滴加入，同时反应烧瓶维持在0℃，然后室温 下搅拌1-2天以保证最大转化；

ii.为了纯化低聚物，通过旋转蒸发除去溶剂，之后在乙酸乙酯中溶解 产物，溶液过滤除去反应中氯离子与三乙胺生成的盐，低聚物在乙 酸乙酯中重结晶两次，最后纯的OPF在乙醚中沉淀出来，并真空干燥 (＜1mmHg)得到粉末固体；

(2)可注射性组织工程心肌产品的OPF水凝胶的制备

iii.OPF和交联剂聚乙二醇-二丙烯酸酯(PEG-DA)以2∶1的重量比混合 于PBS中，加入等体积的热量自由基引发剂混合物搅拌后，加入含有 细胞的PBS悬液使细胞终浓度达到1×10⁷cells/ml，温和混匀后，即 为液态的基于OPF水凝胶的可注射性心肌组织工程产品，将悬液注射 到心梗部位5-10分钟即可成胶。

2.权利要求1中所述的方法，其中在步骤(1)中，将纯化的OPF储存在-20℃并 且在使用前通过暴露于环氧乙烷中16小时来灭菌。

3.权利要求1中所述的方法，其中在步骤(2)中，其中热量自由基引发剂为25mM 过硫酸铵(APS)和25mMN，N，N’，N’-四甲基乙二胺(TEMED)的PBS溶液。

4.权利要求1至3中任一项所述的方法，其中可将一种或多种心肌组织工程的种 子细胞与OPF交联，形成水凝胶。

5.权利要求4所述的方法，其中种子细胞可以选择胎儿心肌细胞、胚胎干细胞、 重构胚来源的胚胎干细胞、间充质干细胞或肌肉干细胞定向诱导分化来源的 心肌细胞、未诱导的干细胞中的一种或几种。

6.权利要求1-5的方法所制备的、可用于治疗心肌梗死的可注射性液态支架的 心肌组织工程产品。

7.权利要求6所述的产品，其中所述的产品由OPF水凝胶和与心肌组织工程的 种子细胞组成。

8.权利要求7所述的产品，其中种子细胞可以选择胎儿心肌细胞、胚胎干细胞、 重构胚来源的胚胎干细胞、间充质干细胞或肌肉干细胞定向诱导分化来源的 心肌细胞、未诱导的干细胞中的一种或几种。

9.权利要求6-8所述产品用于制备治疗心肌梗死的药物的用途。

10.权利要求9所述的用途，其中心肌梗死是急性心肌梗死，或是陈旧性心肌梗 死。