[发明专利]N－11端截短的β－淀粉样蛋白的单克隆抗体、组合物、方法和用途

说明书

本申请是以下申请的分案申请：申请日2003年9月9日，申请号 为03823116.6(国际申请号PCT/EP2003/010092)，标题为“N-11端截 短的β-淀粉样蛋白的单克隆抗体、组合物、方法和用途”。

本发明涉及的抗体包括特定的部分或变体，其特异性针对至少是人 β-淀粉样蛋白的N-末端11位点，例如Aβ11-x多肽。还提供了制备 和使用所述抗体的方法，包括治疗性药剂、给药和设备。

发明背景

总体而言，本发明涉及控制β-淀粉样前体蛋白发展的方法和组合 物。更特别的是，本发明涉及该方法和组合物在与阿耳茨海默症和其 它β-淀粉样蛋白相关疾病的治疗相关的诊断、预后和监控中的应用， 以及作为治疗阿耳茨海默症和其它β-淀粉样蛋白相关疾病的方法，所 公开的抗体在被动免疫中的应用。

阿耳茨海默症(AD)是一种退化性大脑紊乱，其临床特征表现为 记忆、认知、推理、判断和情感稳定性持续逐渐丧失，导致深度的智 力衰退，最终死亡。AD是造成老年人持续智力减退(痴呆)的最常见 原因，在美国其被认为是四大最常见疾病死因的代表。AD在全世界的 人种和种族中都存在，是现今和未来的重要公众健康问题。仅在美国， 据估计这种疾病目前就影响了约二到三百万人。目前AD是无法治愈 的。已知现在没有有效的预防AD或消除其症状和病因的治疗手段。

患有AD的病人的大脑表现出称之为老年(或淀粉样)斑块、淀粉 样血管病(在血管上的淀粉样沉积)和神经原纤维缠结的特征性损伤。 在患有AD的病人的大脑中对于记忆和认知重要的几个区域中普遍存 在大量的上述损伤，特别是淀粉样斑块和神经原纤维缠结。对未患有 临床AD的绝大多数老年人的大脑经更严格的解剖检查发现了少量上 述损伤。淀粉样斑块和淀粉样血管病也是患有21三体综合症(Down’s 综合症)、弥漫性Lewy体病、伴有荷兰型淀粉样变性病(HCHWA-D) 的遗传性脑出血的病人的大脑的特征。

淀粉样斑块的主要成分是一类β-淀粉样前体蛋白(APP)通过剪 切产生的β-淀粉样蛋白(Aβ)多肽。过去存在着关于斑块和缠结是 诱因或仅仅是阿耳茨海默症的结果的激烈的科学争论，但最近的发现 表明淀粉样斑块是成的前体和因素。特别是发现Aβ多肽的产生源自 编码淀粉样前体蛋白的基因的突变，该蛋白正常加工时不会产生Aβ 多肽。引起家族性、早发性的阿耳茨海默症淀粉样前体蛋白基因突变 的鉴定最有力地证明了淀粉样代谢是这些疾病发病过程中重要的变 化。目前已确信APP蛋白的加工(非致病)的正常过程是通过一种使 蛋白的Aβ多肽区的16和17氨基酸之间裂解的α-分泌酶的裂解而完 成的。进一步确信致病过程是通过使前体蛋白的Aβ多肽区的氨基端 裂解的β-分泌酶而部分完成的。

目前已证明BACE-1是APP在+1位裂解所需的重要β-分泌酶。 BACE-1的过表达导致Aβ在+11位的额外的裂解，产生较短的Aβ 11-40和Aβ11-42片段，此后也称之为Aβ11-x多肽。已经在原代大 鼠神经元细胞培养物和小鼠N2a细胞的条件化培养基中检测到这些A β多肽，表明它们是神经元(3，4，5)中产生的正常的APP裂解产 物。值得注意的是，这些较短的Aβ片段通过生化分析(6)已经被证 明是AD大脑和正常老年大脑中的主要种类，通过免疫组织化学研究 (7)也证明了在具有AD病理学特征的Down’s综合症大脑中也是这 样。这些事实促使对Aβ11-40/42在阿耳茨海默症发病过程中的作用重 新评价，特别是考虑到由Glu11开始的Aβ种类比由1位开始的Aβ 种类表现为更不溶的事实。

除了了解有关AD和其它Aβ相关疾病的机理之外，还需要研究诊 断和治疗这些疾病的方法和组合物。这样，监测淀粉样前体蛋白的细 胞加工的能力对于诊断、预后、治疗性监管阿耳茨海默症具有很大意 义。特别是希望能确定在容易获得的病人的样品，例如血清、脑脊髓 液(CSF)等中筛选和评估可检测的诊断标记的具有最小侵害性的可重 复性流程。多克隆抗体，例如Said，T.C.et al.，Neuroscience Letters 215(1996)；173-176中所述的那些，能用于检测生物样品中不同的Aβ 多肽，但是考虑到每批多克隆抗体是不同的这一事实，这些抗体不能 作为实施在容易获得的病人的样品中筛选和评估可检测的诊断标记的 可重复性流程的工具。此外，使用多克隆抗体时非特异性结合特别高， 在Western印迹中的准确性很低。