[发明专利]酱油等调味品中菌落总数快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及调味品技术领域，具体地说，本发明涉及一种酱油中菌落总数快速检测方法。

背景技术

酱油等调味品中菌落总数是食品卫生的一项重要指标。目前检测方法主要是利用平板计数方法，该方法检测需要48小时，往往存在滞后现象。在此基础上改进方法仍需要培养12小时以上，不能达到快速检测的目的。目前文献报道ATP生物方法快速检测菌落总数，该方法是利用菌体本身的ATP为检测对象，然而酱油等调味品经过巴氏杀菌，大部分不耐热菌被杀死，部分为亚致死状态，有些菌转变为芽孢状态，因此菌体生长状态不一致，同时酱油等调味品成分复杂，存在干扰ATP生物发光体系的物质，因此在利用该方法检测时往往与实际菌落总数存在很大差异。

发明内容

本发明克服了现有技术中的缺点和不足之处，提出了一种酱油中菌落总数快速检测方法。

发明人认为：针对复杂的酱油等调味品样品，应当解决样品中菌体分离富集和解决菌体生理状态问题，去除干扰物质；对菌体进行修复复壮，保证菌体生理状态一致性，从而保证ATP生物发光检测结果与菌落计数方法结果的一致性，保证ATP发光检测方法适用于酱油产品菌落总数的快速检测。

故而，本发明提出了以下技术方案：

一种酱油中菌落总数快速检测方法，包含以下步骤：

A.利用孔径为0.2-0.45μm滤膜分离富集菌体，去除影响菌体生长和发光体系的物质；

B.将分离的菌体悬浮于修复培养基中在35-37℃修复2-3小时，修复亚致死细菌，转化芽孢为营养体细胞，使细菌处于同步生长状态；

C.设置阳性样本，利用ATP发光方法测定菌悬液与阳性样本的发光值，根据菌落总数与发光值间的数学模型，得出菌落总数；

所述修复培养基由以下组分组成：每1000ml蒸馏水中含有牛肉浸出粉2-5g，酪蛋白水解物15-20g，可溶性淀粉0.5-3g，无水葡萄糖3-7g，L-丙氨酸0.5-1g，肌苷0.25-0.5g，L-天门冬素0.5-2g。

所述的分离富集菌体采用以下步骤：吸取一定量的待测样品，利用无菌生理盐水稀释5-40倍，再进行真空过滤，滤过0.2-0.45μm滤膜，最后以无菌生理盐水洗涤3-5次，去除干扰杂质。

所述的发光值检测，将修复的菌体悬液50-100μl与50-100μlBacTiter-Glo^TM检测试剂反应，利用发光光度计于530-590nm处检测发光值。

本发明还涉及一种用于调味品中菌落总数快速检测的培养基，该培养基由以下组分组成：每1000ml蒸馏水中含有牛肉浸出粉2-5g，酪蛋白水解物15-20g，可溶性淀粉0.5-3g，无水葡萄糖3-7g，L-丙氨酸0.5-1g，肌苷0.25-0.5g，L-天门冬素0.5-2g。

培养基提供细菌生长必需的-营养元素，同时添加促进芽孢萌发的化学物质和促进受伤细菌修复的修复因子，即：L-天门冬素、L-丙氨酸和肌苷。

本发明的优点在于：

本发明针对酱油等调味品成分复杂特点，利用菌体分离富集技术，富集菌体，去除干扰菌体生理状态、影响ATP生物发光的物质；筛选优化培养基，修复复壮菌体，促进芽孢转化为营养细胞，促使菌体处于正常一致的生理状态，将菌体与ATP发光检测试剂反应，利用发光检测仪检测发光值，设置阳性样本(已知菌落总数)，根据阳性样本菌落总数和发光值，建立发光值与菌落数间数学模型，根据已建模型推算出待测样品菌落总数。本发明检测方法快速，在4小时内就能够准确检出菌落总数，远快于国家标准方法(48小时)(GB/T4789.2-2003食品卫生微生物学检验菌落总数测定)，检测成本低廉。

附图说明

图1是菌落总数与相对发光值的关系图。图1表明在研究的菌落总数范围内菌落总数与相对发光值具有良好的相关性(R＝0.9975)，方程为y＝2.14x-857。

具体实施方式

为了更好地理解发明的实质，下面用实施例来详细说明发明的技术内容，但本发明的内容并不局限于此。

实施例1

1.样品过滤用移液管移取10ml液体食品到90ml无菌生理盐水中，振荡摇匀，取10ml该稀释样品过0.2μm-0.45μm膜，收集菌体，对截留在膜上的菌体利用无菌生理盐水反复冲洗三次，去除酱油等调味品中影响细菌修复和干扰发光的物质。表1中列出数据阐述酱油中存在干扰发光的物质。

表1 去除干扰物前后对发光体系的影响