[发明专利]一种新型高效的复杂载体构建的方法

权利要求书

1、一种简便、通用、高效的复杂载体构建方法，在PCR引物设计时，在目的片段5’端加上随机设计的接头，利用PCR克隆目的片段，再用T4DNA聚合酶3′→5′外切酶活性处理PCR克隆目的片段，产生多个首尾相匹配的粘性末端，进行多片段定向连接。

2、根据权利要求1所述的载体构建的方法，在目的片段5’端加上随机设计的2-6个核苷酸接头，在特定的碱基(dATP或dTTP或dCTP或dGTP)保护下，利用T4 DNA polymerase 3’-5’方向的外切酶活性，作用于双链DNA，它能将DNA链上的碱基从3’-5’方向一个个地切下，切到特定的保护碱基为止。这样产生多个首尾相互匹配的粘性末端，进行多片段定向连接。

3、根据权利要求1或要求2所述的DNA片段处理方法，其特征在于该方法可以用构建各种复杂的载体。