[发明专利]戊糖己糖高温产氢菌的分离方法

权利要求书

1、戊糖己糖高温产氢菌的分离方法，其特征在于戊糖己糖高温产氢菌的分离方法按以下步骤实现：一、将4.0～6.0g采集样品放入装有数颗玻璃球的250mL灭菌血清瓶中，然后加入80～120mL灭菌水，通入氮气后封口，而后以100～200r/min的振速振荡4～6h，得菌悬液A；二、取4～6mL菌悬液A转入装有100mL混合糖固体培养基的250mL灭菌血清瓶中，然后在60±2℃的条件下恒温培养3～5天，得富集后菌悬液；三、取1mL富集后菌悬液然后用无菌厌氧水倍比稀释，然后分别取稀释了10⁴倍、10⁵倍和10⁶倍的稀释液1mL进行滚管，而后在60±2℃的条件下恒温培养至管中有菌落出现；四、挑取单菌落放在混合糖液体培养基上，然后在60±2℃的条件下恒温培养至培养液混浊，得菌悬液B；五、取1mL菌悬液B然后用无菌厌氧水倍比稀释，然后分别取稀释了10⁴倍、10⁵倍和10⁶倍的稀释液1mL进行滚管，而后在60±2℃的条件下恒温培养至管中有菌落出现，然后再挑取单菌落放在混合糖液体培养基上培养；六、重复步骤三到步骤五5次，即可分离出戊糖己糖产氢菌。

2、根据权利要求1所述的戊糖己糖高温产氢菌的分离方法，其特征在于步骤一中氮气的纯度为99.99％。

3、根据权利要求1所述的戊糖己糖高温产氢菌的制备方法，其特征在于步骤一中以150r/min的振速振荡5h。

4、根据权利要求1所述的戊糖己糖高温产氢菌的分离方法，其特征在于步骤二中固体培养基由1.0g的氯化铵、2.0g的氯化钠、0.3g的磷酸氢二钾、0.3g，的磷酸二氢钾、0.5g的半胱氨酸、0.2g的MgCl₂·6H₂O、0.2g的氯化钾、2g，的酵母粉、2g的蛋白胨、1mL的微量金属元素贮液、1mL的维生素贮液、1mL的浓度为0.1‰(w/v)刃天青、2％的琼脂、浓度为1～10g/L的葡萄糖、浓度为1～10g/L的木糖和1000mL的蒸馏水组成。

5、根据权利要求4所述的戊糖己糖高温产氢菌的分离方法，其特征在于微量金属元素贮液由1.5g的氯化亚铁、70mg的氯化锌、6mg的硼酸、0.1g的MnCl₂·4H₂O、2mg的CuCl₂·2H₂O、0.19g的CoCl₂·6H₂O、24mg的NiCl₂·6H₂O、36mg的Na₂MO₄·H₂O、15mg的钨酸钠和15mg的Na₂SeO₄·5H₂O溶于1000mL的蒸馏水制成。

6、根据权利要求4所述的戊糖己糖高温产氢菌的分离方法，其特征在于维生素贮液由50.0mg的硫辛酸、20.0mg的生物素、0.35g的烟酸、5.0mg的盐酸硫胺素、50.0mg的对氨基苯甲酸、20.0mg的叶酸、50.0mg的泛酸钙、1.0mg的维生素B₁₂和100.0mg的盐酸吡哆醇溶于1000mL蒸馏水制成。

7、根据权利要求1所述的戊糖己糖高温产氢菌的分离方法，其特征在于步骤四中液体培养基由1.0g的氯化铵、2.0g的氯化钠、0.3g的磷酸氢二钾、0.3g，的磷酸二氢钾、0.5g的半胱氨酸、0.2g的MgCl₂·6H₂O、0.2g的氯化钾、2g，的酵母粉、2g的蛋白胨、1mL的微量金属元素贮液、1mL的维生素贮液、1mL的浓度为0.1‰(w/v)刃天青、浓度为1～10g/L的葡萄糖、浓度为1～10g/L的木糖和1000mL的蒸馏水组成。