[发明专利]胃癌靶向FUT3基因的miRNAs表达载体的构建、筛选及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及表达α-1，3/4-岩藻糖基转移酶(α1，3/4-fucosyltransferase，FUT3)基因的胃癌的基因治疗药物，具体涉及靶向胃癌FUT3基因的miRNAs表达载体的构建、筛选及其用途，属于生物医药技术领域。

背景技术

FUT3基因编码的FUT3酶是岩藻糖基转移酶(fucosyltransferase，FUTs)家族成员之一，因其既有α1，4-岩藻糖基转移酶活性，又有α1，3-岩藻糖基转移酶活性，所以又称α1，3/4-岩藻糖基转移酶。它不仅参与路易斯(Lewis)血型抗原I型(包括Lewis A和Lewis B)和II型(包括Lewis X和、Lewis Y)的生物合成，而且也与唾液酸化的Lewis抗原(Sialyl Lewis A和Sialyl Lewis X，即SLea和SLex)的合成密切相关。SLea和SLex在许多肿瘤细胞表面表达量异常升高，是血管内皮细胞(E)表面或血小板(P)表面选凝素(selectin)的配体；SLe^a和SLe^x抗原作为肿瘤相关抗原，它们在肿瘤细胞上的表达水平还与肿瘤转移相关。大多数肿瘤患者血清和肿瘤组织中岩藻糖基转移酶的活力大大增强，特别表现在肺癌、胃癌、卵巢癌中。肿瘤患者血清中岩藻糖基转移酶的活力水平与癌症的进程及病灶的大小有关。近年来，有学者致力于改变岩藻糖基转移酶的活性进而影响Lewis抗原的表达，去影响恶性肿瘤细胞的黏附等恶性行为的研究。通过应用分化诱导剂改变肝癌细胞中FUT7的表达，下调SLe^x的表达，从而抑制其转移潜能(Liu F，Qi HL，Zhang Y，etal.Transfection of the c-erbB2/neu gene up regulates the expression of sialy LewisX，alpha  1，3-fucosyltransferase VII，and metastatic potential in a humanhepatocarcinoma cell line.Eur J Biochem，2001 Jun；268(12)：3501-12)。Weston等通过针对FUT3的反义核酸来阻断α1，3-岩藻糖基转移酶基因表达，抑制肝癌细胞的黏附和迁移(Weston BW，Hiller KM，Mayben JP，Manousos GA，Bendt KM，Liu R，Cusack.JCJr.Expression of Human alpha(1，3)-fucosyltransferase antisense sequences inhibitsselectin-mediated adhesion and liver metastasis of colon carcinoma cells.CancerRes.1999 May 1；59(9)：2127-35.)。美国Scripps研究所的华裔科学家王启辉(Chi-HueyWong)，首先应用3种不同的糖基转移酶，酶促合成了SLe^X，为抗肿瘤药物的研制提供了新途径。以上研究提示，抑制Lewis基因表达的药物和方法将会影响肿瘤细胞的增殖，从而达到抗肿瘤治疗的目的。

基因封闭技术是基因治疗研究的重点和热点之一，它包括反义寡核苷酸、反义RNA、核酶、RNA干扰等。miRNA是新兴的RNAi技术，是含量丰富的非编码小RNA(21-25个核苷酸)，由Dicer酶切割内源性表达的短发夹结构RNA(hairpin RNA，hpRNA)形成。miRNA可以与蛋白因子形成RISC蛋白复合物，可以结合并切割特异的mRNA而引发RNA沉默。miRNA是一项快速、高效和便于操作的使靶基因失活的新技术，为将来可控地打开或关闭某一特定基因奠定了基础，同时还为疾病治疗开辟了新途径。