[发明专利]水溶性酵母β－葡聚糖及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种由酵母制备酵母多糖的方法，特别涉及到一种水溶性酵母β-葡聚糖的制备方法。 

背景技术：

酵母是一种非常重要的工业微生物，大多数酵母作为粗饲料进行廉价处理，没有做进一步的深加工，不能形成对副产物的真正综合利用。部分企业更是将其直接排放，造成了极大的资源浪费和环境污染。 

β-1，3-葡聚糖普遍存在于多种真菌、植物和海藻细胞壁中，是一种极富生物活性的免疫多糖，已证实对肿瘤、肝炎、糖尿病、心血管、降血脂等疑难病都有较好的治疗效果。β-1，3-葡聚糖还是一种良好的生物效应调节剂(BRMs)，它能够通过刺激免疫系统而提高机体的免疫能力，BRMs在相互依赖的机体系统中，对维持体内平衡是非常关键的，它帮助机体适应环境和心理压力。 

酵母细胞中除含有大量的蛋白质外，还含有甘露聚糖、甘露糖蛋白、β-1，3-葡聚糖、其他杂多糖和几丁质等成分。目前已被应用的酵母多糖产品主要有甘露糖系列的甘露聚糖、甘露寡糖、甘露糖蛋白，含多种多糖成分的酵母聚糖，非水溶性的酵母细胞壁β-1，3-D-葡聚糖等。尚未有水溶性酵母β-1，3-葡聚糖的生产和应用。 

利用酵母细胞壁提取β-1，3-葡聚糖的方法较多，主要有酸法提取、碱法提取、酸碱一体法、有机溶剂提取、自溶-酶-碱法、超声波提取、酶法等，通常所得的β-1，3-葡聚糖为非水溶性酵母葡聚糖，分子量巨大，为人体难以吸收的组分。在中国专利(CN：1583802A)中披露了一种β-1，3-葡聚糖的制备方法，该方法采用碱提取、酸提取、有机溶剂浸提得到的酵母β-1，3-葡聚糖，为非水溶性酵母葡聚糖，对此β-1，3-葡聚糖再通过甲酸降解，得到不同分子量的水溶性酵母β-1，3-葡聚糖；在另一中国专利(CN：101012468)中披露了一种β-1，3-葡聚糖的制备方法，该方法采用高温提取、酶处理、有机溶剂浸提得到的酵母β-1，3-葡聚糖，也是一种非水溶性酵母葡聚糖。此类酵母β-1，3-葡聚糖的含量较低，一般在70％左右，含有多种非生物活性的杂质。由于非水溶酵母β-1，3-葡聚糖分子量高，不能溶解于水，而人体中没有β-糖苷酶，很难直接吸收，只能通过肠道微生物降解吸收，大大降低了酵母β-1，3-葡聚糖的生物利用率。 

目前，各种报道中所得到的酵母β-1，3-葡聚糖大都是非水溶性酵母葡聚糖，非水溶性葡聚糖由于难溶于水，其应用范围受到极大限制。部分水溶酵母β-1，3-葡聚糖也是通过非水溶性酵母葡聚糖降解或修饰得到。经过降解的寡葡聚糖或经过修饰的葡聚糖，虽然溶解性得到改善，但制备成本大大提高，同样限制了在某些领域的大量应用。 

发明内容：

针对现有酵母β-葡聚糖存在的诸多不足，本发明提供一种以酵母完整菌体为原料制备的水溶性酵母β-葡聚糖及其制备方法，该葡聚糖的分子量为8-20万Dalton，可完全溶于水。所提供的水溶性酵母β-葡聚糖的制备方法工艺简单、产率较现有技术有了较大的提高，且对酵母菌达到了最大程度的利用。 

本发明所述的酵母β-葡聚糖以完整酵母菌为原料制得，为β-1，3-D-葡聚糖，以β-1，3-葡聚糖为主链，β-1，6-葡聚糖为支链，其重均分子量范围为8-20万Dalton，一般可以达到10万Dalton以上，，高度纯化后，其重均分子量为12-15万Dalton，可完全溶于水。 

本发明所述的β-葡聚糖的制备，是通过热水处理、碱提取、酸中和、醇沉淀、色谱柱层析等过程实现的。对制备水溶性酵母β-葡聚糖后的残渣，又通过酶解获得高含量的非水溶性酵母β-葡聚糖，具体步骤如下： 

1.热水处理：向酵母菌粉或鲜酵母中加入纯净水，使菌体重量为总重量的2-20％(w/v)优选5-10％(w/v)，其中当使用鲜酵母时，将鲜酵母的重量折算成干酵母重量计算即可，升温到50-121℃，搅拌反应0.5-2h，之后3000-12000r/min离心，收集沉淀物I；清液减压浓缩至原体积的1/3-1/15，加入乙醇，该乙醇浓度为80-100％(v/v)，使清液中的醇浓度达到60-80％(v/v)醇沉，使沉淀，该沉淀物为甘露聚糖；