[发明专利]早孕因子中具有免疫抑制作用的关键活性肽段

说明书

一、技术领域：

本发明涉及动物繁殖免疫学领域，特别是涉及哺乳动物早孕因子的部分肽 段。

二、背景技术：

早孕因子(early pregnancy factor，EPF)是雌性哺乳动物受精后，所发现的 一种最早能在血清中检测到的具有免疫抑制和生长调节作用的妊娠相关蛋白。 1974年，澳大利亚学者Morton在进行玫瑰花环抑制试验(RIT)时，首次在妊 娠小鼠血清中检测到了EPF活性，由于EPF在小鼠受精后4～6h即可检测到， 便将其命名为“早孕因子”。该发现引起了世界各国专家学者的关注，随后在妊 娠妇女、羊、猪、牛等妊娠哺乳动物母体血清中均检测到了EPF活性，发现EPF 对妊娠母体具有很高的特异性。小鼠受精后4h，兔受精后16h，大鼠、绵羊、 牛、猪受精后24h，人受精后48h，均可在血清中检测到EPF活性；EPF活性在 小鼠血清中可持续至分娩前4d，在绵羊、猪血清中几乎持续整个孕期，在人可 持续至妊娠第6个月，一旦妊娠终止，血清中EPF立即消失。

EPF能抑制T淋巴细胞介导的细胞免疫，抑制玫瑰花环的形成，防止母体 对胚胎乃至胎儿发生免疫排斥反应，也是恶性肿瘤细胞分泌的一种免疫抑制剂， 在烧伤、溃疡及类风湿等伤口愈合中，有着生长因子的作用特点。

EPF对温度和酸碱度的耐受性较强，低于56℃时很稳定，超过72℃时容易 失活，EPF由102个氨基酸残基的糖蛋白分子组成，人、猪和牛的EPF氨基酸 序列完全相同，分子量均为10.93kD，等电点约为6.5；小鼠EPF氨基酸序列和 人的纯合度为97％，分子量为10.96kD，等电点约为6.8。EPF与热休克蛋白家 族成员伴侣蛋白10(cpn10)高度同源，但与cpn10在细胞定位和功能上又不同， EPF是cpn10在细胞外发挥的效应。cpn10在细胞内与cpn60特异性结合，辅助 蛋白质的正确折叠，但在细胞外则表现EPF的活性。

EPF的生物学特性主要体现在抑制免疫和生长调节两方面。首先，具有抑 制母体的免疫反应而使精子、胚胎免受免疫排斥的作用，也是目前最早确认妊 娠的生化标志之一；其次是EPF能促进肿瘤细胞的生长，也能促进烧伤、溃疡 等伤口的愈合。由于EPF能增强抗淋巴细胞血清(ALS)抑制T细胞花环的形成， 因此，玫瑰花环抑制试验(RIT)为检测EPF活性的经典方法。EPF在动物繁殖领 域可用于动物的早期、超早期妊娠诊断，在妊娠中断的检测、胚胎生物技术在 胚胎移植后的成活情况，以及评价雄性繁殖力和繁殖免疫疾病的治疗等方面有 着重要价值。

三、发明内容：

本发明要解决的技术问题：提供一种哺乳动物早孕因子的部分合成肽段， 该肽段在免疫抑制上具有EPF的生物学活性。

本发明的技术方案是：

本发明是根据人的EPF/Hsp10

(H-Met-Ala-Gly-Gln-Ala-Phe-Arg-Lys-Phe-Leu-Pro-Leu-Phe-Asp-Arg-Val-Leu-V al-Glu-Arg-Ser-Ala-Ala-Glu-Thr-Val-Thr-Lys-Gly-Gly-Ile-Met-Leu-Pro-Glu-Lys-Se r-Gln-Gly-Lys-Val-Leu-Gln-Ala-Thr-Val-Val-Ala-Val-Gly-Ser-Gly-Ser-Lys-Gly-Ly s-Gly-Gly-Glu-Ile-Gln-Pro-Val-Ser-Val-Lys-Val-Gly-Asp-Lys-Val-Leu-Leu-Pro-Glu -Tyr-Gly-Gly-Thr-Lys-Val-Val-Leu-Asp-Asp-Lys-Asp-Tyr-Phe-Leu-Phe-Arg-Asp-G ly-Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val-Asp-OH)，采用多肽合成的方法，分段合成不 同长度的肽段，再对各个肽段进行免疫抑制活性检测，发现：

H-Phe-Arg-Asp-Gly-Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val-OH和含有该段肽的肽段具有 抑制玫瑰花环的形成，在免疫抑制上，具有EPF的生物学活性。

本发明的哺乳动物的具有免疫抑制作用的关键活性肽段的氨基酸序列为 Phe Arg Asp Gly Asp Ile Leu Gly Lys Tyr Val。

该肽段为早孕因子的部分合成多肽。