[发明专利]快速诊断日本血吸虫病的胶体碳试纸条

说明书

技术领域：

本发明涉及寄生虫病诊断领域，具体涉及快速诊断日本血吸虫病的胶体碳层析试纸条的 建立。

背景资料：

血吸虫病是一种严重危害人类身体健康和生命安全、阻碍疫区经济发展和社会进步的人 兽共患病。全世界74个国家，6亿人受感染威胁，2亿人被感染，其中1.2亿人出现症状，2000 万人被严重感染。血吸虫病病情的控制至今仍然是急待解决的一个严重的公共卫生问题。迄 今，在我国湖南、湖北、安徽、江西、江苏、云南、四川7个省市流行仍较严重。血吸虫病快 速诊断的研究对于传染源的监测、疫情的控制将起到积极作用。因此，研究简便快速、准确 灵敏、能诊断多种动物，并能对感染程度进行定量或半定量检测的新型诊断技术和方法，已 成为当前血吸虫病诊断迫切需要解决的问题。

快速诊断试纸条(dipstick)是20世纪90年代以来发展起来的一项新型体外诊断技术，因其 操作简便、快速，更适用于门诊使用和现场普查及轻度流行区的筛查，在生物医学领域特别 是医学检验中得到了广泛应用。在目前的快速诊断试纸条中，应用标记物一般为胶体金和胶 体染料，标记的蛋白有抗原、葡萄球菌蛋白A(SPA)、二抗等，皆能达到一定的敏感性和特 异性，但一般只针对一种生物进行检测，且无法定量或者半定量检测血吸虫病的感染程度， 不能满足日本血吸虫病诊断的需要。

朱荫昌(朱荫昌，何伟，华万全，等.血吸虫病快速诊断——胶体染料试纸条法的研究 [J].中国血吸虫病防治杂志，2000，12(1):18-20.)用胶体染料标记日本血吸虫可溶性虫卵抗原 (SEA)，再用羊抗人IgG包被硝酸纤维素膜(NC膜)捕获标记抗原与抗体的复合物；曾小军(曾 小军，陈红根，袁建华.快速胶体金免疫层析法的建立及其对血吸虫病的诊断效果[J].中国血 吸虫病防治杂志，2005，17(1):24-27.)用胶体金标记羊抗人多克隆抗体，以此检测患者血清中 的抗血吸虫抗体。但标记蛋白和检测线捕获蛋白用相应的抗体只能应用于某种动物的检测， 上述方法只能完成人的血吸虫病诊断，不能对其它动物进行诊断，且不能进行定量或半定量 检测。

雷家慧(应用胶体金SEA-Dipstick法检测日本血吸虫病血清抗体的研究[J].中国人兽共 患病杂志，2001，17(2):22-24.)和喻鑫玲(喻鑫玲，何永康，杨瑞清.胶体金SPA双联抗体检测 试纸条法诊断日本血吸虫病的初步研究[J].实用预防医学，2006，13，(3):521-523)应用金标SPA 作为显色剂，分别以SEA和SEA、童虫抗原(SSA)双联抗原包被NC膜检测日本血吸虫抗体。 何伟等(何伟，朱荫昌，曹国群.胶体染料试纸条法检测牛血吸虫病的进一步研究[J].中国血吸 虫病防治杂志，2006，18，(4):270-274.)采用胶体染料标记SEA，以葡萄球菌A蛋白(SPA)包被 NC膜作为捕捉蛋白，实现多种动物的血吸虫病检测。上述方法中应用了能与人及多种哺乳动 物IgG的Fc段结合的SPA，可对多种动物的血吸虫病进行检测。但SPA与IgG的结合不属于抗 原抗体反应，其结合能力主要决定于IgG的来源及其亚类。不同来源IgG与SPA亲合力的顺序 为猪>狗>人>猴>豚鼠>小鼠>牛。其对绵羊、大鼠来源IgG的亲和力较差，与犊牛、马、山羊 的IgG则不能结合，因而标记SPA同样存在其自身的局限性。同样，仍无法做到血吸虫病的定 量或半定量检测。

据报道，双抗原夹心法其敏感性和特异性比其他方法要高(彭运潮，胡述光，刘增再，等. 免疫胶体金技术诊断日本血吸虫病的研究进展[J].动物医学进展，2005，26(10):23-27.)。 金颜辉等(金颜辉，张长弓，方莹，等.口蹄疫抗体免疫金标快速检测试纸法的建立[J].福建 畜牧兽医，2004，26(1):4-5.)采用双抗原夹心法建立了检测口蹄疫O型抗体的免疫胶体金快 速检测试纸条法，并与ELISA法进行了比较，其符合率达100％。彭运潮等(彭运潮，刘金明，孙 安国，等.快速诊断家畜日本血吸虫病免疫层析试纸条的研制与初步应用[J].中国血吸虫病 防治杂志，2006，18(3):197-200.)利用双抗原夹心的原理建立了GICA法用于多种动物血吸虫 病的检测，其阳性率达91.6％，阴性符合率达87.5％，具有较高的灵感性和特异性。但在诊断 日本血吸虫病的快速诊断试纸条中无论是应用胶体金还是胶体染料作标记物，都没能完成血 吸虫病的定量或半定量检测。

发明内容：