[发明专利]一种用于大眼鳜和斑鳜的分子鉴定方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于大眼鳜和斑鳜的分子鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：

1)DNA提取：提取基因组DNA并测定其纯度和浓度；

2)DNA片段扩增：采用聚合酶链式反应扩增DNA片段，扩增引物序列为：正向引物：5′GGCTCGTAGAAGCAGTAGGT 3′，

反向引物：5′GGGATAATGTAGTAGGTGGATT 3′；

3)PCR产物的电泳及银染色鉴定：采用非变性聚丙烯酰胺凝胶，进行常规银染色；

4)与标准图谱进行对比：如样品在靠近标准Marker的300bp位置扩增出一条特异性DNA条带，则鉴定为斑鳜；如样品在靠近标准Marker的400bp位置扩增出1条DNA条带，则鉴定为大眼鳜。

2.根据权利要求1所述的一种用于大眼鳜和斑鳜的分子鉴定方法，其特征在于：1)步骤中测得DNA的A₂₆₀/A₂₈₀比值为1.78～1.83。

3.根据权利要求1所述的一种用于大眼鳜和斑鳜的分子鉴定方法，其特征在于：1)步骤中测得DNA的浓度范围为385.8～3167.5ng/μl。

4.根据权利要求1所述的一种用于大眼鳜和斑鳜的分子鉴定方法，其特征在于：2)步骤中PCR反应体系为：模板DNA 50ng，10×buffer 2.5μl，25mmol/LMgCl₂ 2.5μl，dNTPs 1.0mmol/L，引物0.4μmol/L，Taq DNA聚合酶1.0U，去离子水补齐至25μl。

5.根据权利要求1所述的一种用于大眼鳜和斑鳜的分子鉴定方法，其特征在于：2)步骤中PCR反应程序为：94℃预变性5min，然后按以下条件进行32个循环：94℃变性30s，53～58℃退火40～45s，72℃延伸1min，循环结束后72℃延伸10min结束，4℃中保存。

6.根据权利要求1所述的一种用于大眼鳜和斑鳜的分子鉴定方法，其特征在于：3)步骤中采用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶。

7.实施权利要求1所述分子鉴定方法的试剂盒，其特征在于其中包括有：一对引物和标准图谱，所述引物序列为：

正向引物：5′GGCTCGTAGAAGCAGTAGGT 3′，

反向引物：5′GGGATAATGTAGTAGGTGGATT 3′。