[发明专利]缬草环烯醚萜生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种缬草环烯醚萜的生产方法。

背景技术

缬草为败酱科缬草属(Valeriana L.)多年生草本植物。在我国资源稍多的主要有4种：缬草(Valeriana officinalis L.)、宽叶缬草(Valerianaofficinalis L.var.latifolia Miq.)、黑水缬草(Valeriana amurensisSmir.ex Kom)和蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)，自东而西主要分布于中南、西南、西北、东北山区及丘陵地带。缬草根茎中主要含环烯醚萜类、倍半萜类、生物碱类、木脂素类、黄酮类等生物活性成分，具有显著的平滑肌解痉、增加冠脉流量、抗心律失常、抗肿瘤、镇静安神等作用，是优良的天然药物资源。我国目前所用缬草基本为野生状态，人工种植才刚开始，野生缬草中环烯醚萜含量要三年左右生的植株才能达到较高的水平，由于三年龄的缬草量少，造成采收时一年、二年、三年生缬草一并采收，这样致使野外资源越来越少，资源短缺现象严重，且缬草环烯醚萜类化合物含量低不稳定。从加工的角度来看目前企业的缬草素提取物的成分复杂，产品纯度不高，有的还存在重金属超标，这样一来就降低了缬草提取物的稳定性和药用价值。比如中国专利CN1396166一种制备总缬草素的新方法，介绍了用石油醚提取总缬草素的方法，得到的是总缬草素总浸膏。中国专利CN1337255一种缬草提取物的制备方法，采用乙醇渗漉后，将渗漉液浓缩干燥即为产品；中国专利CN1370586A北缬草有机溶剂提取物的医药用途，介绍了甲醇提取物为产品；中国专利CN1475490A一种缬草提取物及其制备方法和用途，介绍了用对缬草先用超临界二氧化碳提取挥发油，余渣用乙醇渗漉后浓缩干燥即为缬草素产品。以上几种方法是将提取溶剂浓缩干燥即可，因而所得的缬草素产品纯度不高，并且总产出周期间长。因此如何利用有限的资源快速生产出纯度高性能稳定的缬草素药用产品，是目前亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种产品纯度高、性能稳定、产出周期短的缬草环烯醚萜生产方法。

本发明提供的缬草环烯醚萜生产方法包括以下步骤：

(1)缬草愈伤组织诱导培养及处理：将缬草外植体接种在含相应植物生长调节物质的MS固体培养基上进行培养，pH调至5～7，温度25℃±2℃，光照强度1200～2500lx，光照时间每天6～18小时，在固体培养基上每15～30天继代一次，选择生长快、颜色浅、颗粒均匀的细胞作为继代培养，选出环烯醚萜高的缬草愈伤组织；

(2)细胞悬浮培养：将步骤(1)获得缬草愈伤组织转移到液体培养基中，在三角瓶、种子罐中进行逐步扩大培养，将经过扩大培养的缬草细胞接种于生物反应器的液体培养基中进行规模化缬草细胞悬浮培养，培养条件：温度25℃±2℃，pH 5～7，光照强度1200～2500lx，光照时间每天6～18小时，搅拌转速为50～150r/min，培养时间8～25天，收获缬草细胞；

(3)环烯醚萜提取分离：将步骤(2)收获的缬草细胞过滤后干燥粉碎得到缬草细胞干粉，将此干粉放入浸提罐中并加入乙醇溶剂，用乙醇溶剂超声波辅助提取，将提取液过滤、除去滤渣，滤液减压浓缩为环烯醚萜浸膏，将所述浸膏用醇水溶液溶解，经大孔吸附树脂初步分离，再经反相C₁₈柱精细分离，浓缩干燥后得到缬草环烯醚萜产品。

由于本发明生产方法通过对缬草细胞大规模培养，将所获得的培养细胞提取分离生产环烯醚萜和其他活性物质，则可使在野外三年才能收获的缬草植株改为10-25天就可收获一次缬草细胞，而且原料的有效成分稳定，提取的产品中缬草环烯醚萜类化合物纯度高，使得环烯醚萜提取分离工艺过程便于控制，生产过程易操作，提取分离的生产成本下降。解决了缬草环烯醚萜生产的原料问题，提高了产品纯度和质量，所用溶剂可回收，相对生产成本低。

具体实施方案

实施例一、这是一个用宽叶缬草(Valeriana officinalis L.var.latifoliaMiq)根作为外植体，培养缬草环烯醚萜细胞，生产环烯醚萜产品的实例，其生产方法按如下步骤进行：