[发明专利]霉菌毒素青霉酸单克隆抗体及其制备方法

权利要求书

1、一种青霉酸单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体是能特异性地与青霉酸结合的IgG1型单克隆抗体，所述单克隆抗体是完全抗原PA-BSA免疫小鼠脾脏所得脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合得到的杂交瘤细胞产生的。

2、根据权利要求1所述的一种青霉酸单克隆抗体，其特征在于，所述的小鼠脾脏是用完全抗原PA-BSA免疫Balb/c小鼠，免疫四次后采血检测血效价，选择抗血清效价高、竞争抑制强的小鼠脾脏；所述的杂交瘤细胞是将免疫3天后脾细胞与SP2/0细胞按10：1的比例在50％PH8.0的PEG作用下进行细胞融合；然后进行选择性培养，用已建立好的间接ELISA进行阳性克隆的筛选，筛选出的阳性克隆细胞采用有限稀释法进行3次连续克隆，直到阳性率达100％获得的；所述杂交瘤细胞的染色体数目为95-108条，平均98条。

3、根据权利要求1所述一种青霉酸单克隆抗体，其特征在于所得到的单克隆抗体与黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、T-2毒素和伏马毒素均无交叉反应率。

4、一种制备权利要求1所述青霉酸单克隆抗体的方法，其特征在于包括以下步骤：将青霉酸分别与载体蛋白偶联获得完全抗原，免疫小鼠，选择抗血清效价高、竞争抑制强的小鼠脾脏进行免疫，然后采用杂交瘤技术，把骨髓瘤细胞和免疫的小鼠脾细胞融合、克隆筛选、扩大培养和动物体内诱生腹水法获得单克隆抗体。

5、根据权利要求4所述青霉酸单克隆抗体的方法，其特征在于，首先合成完全抗原PA-BSA，然后用完全抗原PA-BSA免疫Balb/c小鼠，免疫四次后采血检测血效价；选择抗血清效价高、竞争抑制强的小鼠脾脏进行第五次免疫，不加佐剂；免疫3天后取脾细胞与清SP2/0细胞按10∶1的比例在50％PH8.0分子量1450的PEG作用下进行细胞融合；然后用HAT和HT培养基进行选择性培养，用已建立好的间接ELISA进行阳性克隆的筛选，筛选出的阳性克隆细胞采用有限稀释法进行3次连续克隆，直到阳性率达100％；再取阳性杂交瘤细胞注射到BALB/c小鼠腹腔内，每只0.5-1×10⁶个细胞，10天后当小鼠腹部明显增大时收集腹水，离心去油脂和沉淀后，取上清液，采用饱和硫酸铵和辛酸-硫酸铵沉淀法提纯，获得单克隆抗体。