[发明专利]测定糖化蛋白质的组合物

权利要求书

1.一种计算样品溶液的糖化清蛋白比率的方法，包括以通过将蛋白酶 和该样品溶液反应消化清蛋白，和利用至少与糖化氨基酸反应的酶测定的 糖化清蛋白的测定值除以用溴甲酚紫单独测定的该样品溶液的清蛋白量， 其中所述溴甲酚紫测定包括用蛋白质变性剂和/或具S-S键的化合物预处理 样品并同时或随后测定清蛋白，所述蛋白质变性剂和/或具S-S键的化合物 是2,2’-二硫代二安息香酸、4,4’-二硫代二吗啉、2,2’-二羟基-6,6’-二萘二硫 (DDD)、2,2’-二硫代吡啶(2-PDS)、4,4’-二硫代吡啶(4-PDS)、5,5’-二 硫代二-(2-硝基安息香酸)(DTNB)或十二烷基硫酸钠，所述蛋白酶是来 自微生物的蛋白酶，所述至少与糖化氨基酸反应的酶是通过基因重组产生 的酮胺氧化酶，或者通过将序列表SEQ ID No.1氨基酸序列中的第372位 赖氨酸替代为选自色氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸的另一氨基酸而与糖化缬氨 酸的反应性显著减小的突变果糖基氨基酸氧化酶。

2.一种计算样品溶液的糖化清蛋白比率的方法，包括以通过使该样品 溶液和至少与糖化氨基酸反应的酶进行反应，然后与蛋白酶进行反应来测 定的糖化清蛋白的测定值除以用溴甲酚紫单独测定的该样品溶液的清蛋白 量，其中所述溴甲酚紫测定包括用蛋白质变性剂和/或具S-S键的化合物预 处理样品并同时或随后测定清蛋白，所述蛋白质变性剂和/或具S-S键的化 合物是2,2’-二硫代二安息香酸、4,4’-二硫代二吗啉、2,2’-二羟基-6,6’-二萘 二硫(DDD)、2,2’-二硫代吡啶(2-PDS)、4,4’-二硫代吡啶(4-PDS)、5,5’- 二硫代二-(2-硝基安息香酸)(DTNB)或十二烷基硫酸钠，所述蛋白酶是 来自微生物的蛋白酶，所述至少与糖化氨基酸反应的酶是通过基因重组产 生的酮胺氧化酶，或者通过将序列表SEQ ID No.1氨基酸序列中的第372 位赖氨酸替代为选自色氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸的另一氨基酸而与糖化缬 氨酸的反应性显著减小的突变果糖基氨基酸氧化酶。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中将选自二甲基亚砜、醇、水溶 性钙盐、氯化钠、季铵盐和季铵盐型阳离子表面活性剂的蛋白酶稳定剂添 加到蛋白酶中。

4.如权利要求1或2所述的方法，其中将选自糖醇、蔗糖、水溶性镁 盐、水溶性钙盐、硫酸铵、氨基酸和肌氨酸的用于至少与糖化氨基酸反应 的酶的稳定剂添加到所述至少与糖化氨基酸反应的酶中。

5.如权利要求1或2所述的方法，其中蛋白酶来自芽孢杆菌属(Bacillus) 的微生物。