[发明专利]1株葡糖醋杆菌及其筛选纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及1株葡糖醋杆菌及筛选纯化方法。

本发明得到的菌株已于2008年11月21日在中国典型培养物保藏中心保藏，编号：CCTCC NO：M208234，名称：葡糖醋杆菌G-29(Gluconacetobacter sp.)。

葡糖醋杆菌G-29是由残次青李中分离得到，根据分离该菌株的样品来源的名称和该菌株的编号命名为G-29。

背景技术

关于细菌纤维素，国外已经有120年的研究历史了，而中国从上世纪八十年代才开始起步。细菌纤维素和植物纤维素一样，都是由葡萄糖基通过β-1，4-糖苷键连接起来的大分子。植物纤维素是造纸、纺织、生物降解材料、医药、食品添加剂等工业的重要生产原料，但由于植物中木质素、半纤维素等的存在，使得高纯度纤维素的提取、精制成为工业领域的一项重大技术难题。而细菌纤维素由于具有纯度高、结晶度高、机械强度高、吸水量高及生物相容性好等优点，越来越成为科学界研究的热点。目前细菌纤维素已经成功应用于食品工业、化妆品业、造纸工业、声音振动膜、液晶材料、人造皮肤、药物载体、重金属离子吸收及生物降解材料等众多领域。

国内关于细菌纤维素产生菌的研究主要集中在木葡糖醋杆菌上(Gluconacetobacterxylinus)，关于其它产纤维素的细菌研究很少，在一定程度上制约了国内细菌纤维素的开发与应用。筛选不同新菌株为生产细菌纤维素不仅可以提供更多的原料，还能进一步丰富我国的菌种资源。是很重要的微生物类群，其菌体、菌落在外观和生理生化方面与醋杆菌、葡糖杆菌、葡糖酸杆菌非常相似，不借助DNA分析很难把它们区分。细菌纤维素具有纯度高、结晶度高、机械强度高、吸水量高及生物相容性好等优点，研究和开发细菌纤维素制品日益成为食品、造纸、声音振动膜、医用材料、污水治理及生物降解材料等领域的热点。近年，我国关于产纤维素细菌的分类划分非常混乱，依然沿用旧的命名法，关于其次级代谢产物--纤维素的研究主要停留在理论研究方面，还没有用于工业生产方面。关于葡糖醋杆菌属这方面的研究，尤其是关于中间葡糖醋杆菌(Gluconacetobacter intermedius)的研究较少，本发明筛选得到的菌株与中间葡糖醋杆菌在16S rDNA分子序列比较，同源性高达99％，但它们的生理生化特征明显不一样，确定G-29为新菌种，丰富了我国的细菌菌种资源。

发明内容

本发明的目的是提供1株葡糖醋杆菌，并在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO：M208234；本发明的另一目的是提供葡糖醋杆菌的筛选纯化方法。

本发明的目的有以下技术措施实现

葡糖醋杆菌的筛选纯化方法包括以下步骤：

(1)富集培养

以残次水果的伤残处为原料，接种于含50mg/L放线菌酮和5％乙醇中的富集培养集中，置于恒温培养箱30℃培养5天，有凝胶膜出现者为阳性，并及时挑取培养过程中出现的凝胶膜，转入灭过菌的生理盐水中浸提1天；

(2)平板涂布

将步骤(1)得到的浸提液梯度稀释后涂布于BSH固体平板上并置于置于恒温培养箱30℃培养5天，挑单菌落重新接入BSH液体培养基中培养5天；

(3)初筛：将步骤(2)所产的膜取出放入灭过菌的生理盐水中浸泡1天，取浸提液平板划线置于恒温培养箱30℃培养5天，挑取生长的单菌落转接入斜面培养基中置于恒温培养箱30℃培养3天；

(4)复筛：将培养3天的斜面转接入BSH液体培养基中重新培养，有凝胶膜出现者为阳性，将阳性菌株编号并保藏；

(5)细菌纤维素的鉴定：要筛选能够产纤维素的细菌，一定要做产物的鉴定，主要方法：纤维素酶水解法、染色法，还有红外光谱分析，三者均为阳性，确定筛选是成功的；

(6)生理生化特征和16S rDNA分析：生理生化特征和16S rDNA分析，确定筛选菌株的种类。