[发明专利]人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180单链抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180单链抗体，它通过与BP180的结合，阻断大疱性类天疱疮自身抗体与相应自身抗原BP180的结合，从而阻断由于自身抗体的结合而激活补体所介导的炎症反应，具有治疗大疱性类天疱疮的作用。

背景技术

大疱性类天疱疮(BP)是一种常见而且顽固的自身免疫性水疱病，而且是一种疑难病症，目前缺乏特异性治疗手段而主要依靠糖皮质激素等进行系统免疫抑制。

大疱性类天疱疮病的主要病理改变是以抗BP180自身抗体为主的致病性自身抗体与相应抗原结合，激活补体并引发免疫炎症反应，导致表皮真皮分离形成水疱。目前在临床上对大疱性类天疱疮的治疗包括皮质类固醇激素、免疫抑制剂和其他治疗方法。由于缺乏特异性，因而疗效差且毒副作用显著。根据申请人所进行的资料检索，目前国内外尚没有治疗大疱性类天疱疮的特效药品。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180单链抗体(human anti-BP180 scFv)，可在大肠杆菌中进行可溶性表达，以期利用该人源性的抗大疱性类天疱疮抗原BP180单链抗体解决临床治疗大疱性类天疱疮的问题，并最终成为治疗大疱性类天疱疮的生物药品。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180基因工程抗体，其基因序列在结构上属于单链抗体(scFv)，由轻链可变区基因和重链可变区基因组成，其中：

轻链可变区基因为：

CGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAACTTCCGGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATGTATGCTAACAGCCATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCGCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAAGCTCATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGACCGGCGAGGTATTCGGCGGAGGGACC；

重链可变区基因为：

CTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCTTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGATTGGAGTGGGTGGCAGCTATATCGTATGACGGAAGTAGAAAATATTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCCTCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAATAGCCTGATAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGGGTTCTATTATGATTGGGGGACTTATTACGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTTCA。

上述人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180单链抗体的制备方法，包括以下主要步骤：

a、分离大疱性类天疱疮患者外周血单一核细胞，提取RNA并经过RT-PCR扩增抗体轻重链可变区基因，构建噬菌体抗体库；

b、从噬菌体抗体库中筛选抗BP180噬菌体抗体；

c、利用基因工程手段，获得可溶性表达的人源性抗BP180单链抗体；

d、对所获抗体的结合活性、特异性、亲和力等免疫学特性进行鉴定。

通过生物学实验证明，本发明的人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180单链抗体，具有封闭大疱性类天疱疮自身抗体与相应自身抗原结合的活性，能够阻断由于自身抗体的结合而激活补体所介导的炎症反应，具有治疗大疱性类天疱疮的作用。

具体实施方式