[发明专利]大鼠肝硬化骨质疏松动物模型构建方法

说明书

技术领域

本发明属于将肝硬化动物模型与骨质疏松症动物模型相结合的技术领域，具体涉及到一种大鼠肝硬化骨质疏松动物模型构建方法。

背景技术

越来越多的研究提示，肝硬化(liver cirrhosis)是并发骨质疏松症(osteoporosis，OP)的高危因素之一。主要有如下几方面原因：(1)肝脏在骨骼新陈代谢中起着十分重要的作用，骨的基本结构钙质需要维生素D的协助才能从肠道吸收，但维生素D必须先在肝脏和肾脏中经过羟化才具有活性进而发挥生理作用。肝硬化后维生素D的羟化(即“活化”)功能明显下降，从而使得钙质吸收、血钙稳定和骨钙沉积均受到显著影响。最为重要的是成骨细胞功能障碍，骨形成减少。(2)肝硬化导致门静脉压力升高，胃肠道瘀血，粘膜水肿，影响钙的吸收。血液中的钙质减少后，为了维持血钙浓度，破骨细胞活性增强。此时机体将从骨骼中动员钙质释放入血，从而造成骨吸收增加。(3)除了骨钙吸收减少外，肝硬化患者消化功能减退，将导致蛋白质、微量元素、维生素K等摄入的不足。前二者缺乏将影响骨有机质的形成；维生素K缺乏可使骨钙素合成受阻，骨钙素是促进骨矿化的重要活性物质，骨钙素缺乏必将导致骨矿化障碍。(4)有资料显示乙型肝炎肝硬化患者的骨密度(bonemineral density，BMD)与同龄正常人群相比明显降低，继发性骨量减少及骨质疏松的发生率高达58％。另有报道，肝硬化失代偿期患者骨量减少及骨质疏松的发生率高达83％，其中继发性骨质疏松的发生率高达40.4％。流行病学调查表明，我国是肝炎(尤其是乙型肝炎)肝硬化的高危人群国家，有将近3000万乙肝患者，超过1亿的乙肝携带者，他们的肝功能在反复损害、修复的过程中，很容易出现肝硬化。此类肝性骨病必将进一步影响患者的生存及生活质量，尤其是易罹患多部位(腰椎、髋部及腕关节等)的骨质疏松脆性骨折，其危害已日益受到重视。

然而，目前制约肝硬化继发性骨质疏松症(LC-OP)的病因、相互作用机制、临床防治与基础研究以及新药研发的一个“瓶颈”问题是缺乏适宜的实验动物模型作为研究载体。目前国外虽有建立大鼠肝硬化骨质疏松动物模型的一些方法，但主要是单一采用四氯化碳来诱导造模，存在建模周期长、给药周期及干预模式不统一、缺乏一致公认的实验动物纳入标准及模型评价标准等问题。而国内目前主要采用的仍是小鼠动物模型，实验动物的耐受性差，意外死亡率高，模型时限较短。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供了一种造模周期短、见效快、成本低、使用方便、模型性能稳定、适应性广的大鼠肝硬化骨质疏松动物模型构建方法。

为达到上述目的，本发明采用技术方案是：

1)造模复合物饲料的制备

首先将玉米粉、常规鼠饲料粉及鸡蛋黄粉混合均匀得到A，然后将胆固醇倒入加热融化的新炼猪油中混合得到B，将B加入A中搅拌均匀得到C，用热水溶解脱氧胆酸钠，然后加入C的混合物中搅拌均匀，再加水将混合物调和成粘稠状，将粘稠状混合物平铺于烤盘中，80℃烘烤36小时，自然冷却后，切割成形，常温保存备用，其中按质量比含40％～45％常规鼠饲料粉、37％～42％玉米粉、10％新炼猪油、5％鸡蛋黄粉、2％脱氧胆酸钠和1％胆固醇。

2)其次，取SPF级雄性SD大鼠26只，体重140～160g，随机分为A、B两组进行试验，A组，肝硬化骨质疏松模型组，简称模型组：本组16只大鼠均饲以造模复合物饲料，第1周饮用5％乙醇水溶液；第2周开始饮用8％乙醇水溶液；40％四氯化碳的香油溶液按1.3ml/kg给予皮下注射，每隔5天注射1次，造模时间40天得到大鼠肝硬化骨质疏松动物模型，B组，正常对照组，简称对照组：本组10只大鼠采用常规饲料及水喂养，生理盐水按1.3ml/kg给予皮下注射，每隔5天注射1次，时间40天。

本发明的SPF级雄性SD(Sprague Dawley)大鼠由第四军医大学动物实验中心提供，合格证号；医动证字SCXK(军)2002-005。

附图说明

图1是造模40天后A组(模型组)与B组(对照组)大鼠肝脏大体比较观察；