[发明专利]一种治疗白癜风药物的制备方法及其在临床中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物的制备方法，特别是涉及一种治疗白癜风药物的制备方法及其在临床中的应用。

技术背景

白癜风是临床常见的色素障碍性皮肤病，目前还没有一种有效治疗方法。

白癜风基本病理变化为皮损区表皮内的黑素细胞消失，临床表现为皮肤对称或不对称的色素脱失斑片。其确切病因及发病机制不明，可能与自身免疫异常、遗传因素、黑素细胞的结构缺陷或细胞内酶代谢异常等多种因素有关。许多学者的研究证实白斑中表皮黑素细胞缺失而不是功能失活，所以治疗恢复期的黑素细胞只能外源提供，其来源和恢复机制尚不清楚，现多认为来源于毛囊外根鞘。

正常皮肤中黑素细胞可存在于表皮基底层、真皮、血管周围和毛囊，都可成为黑素细胞的来源地。临床观察发现，白癜风治疗后色素的恢复与毛囊有密切关系，表现为毛囊口周围色素小岛，逐渐增多，扩大融合，在掌跖及粘膜等无毛囊的部位，白癜风很难恢复。进一步研究表明，毛囊中存在“黑素细胞贮存库”，毛囊中休眠的黑素细胞在白癜风时并不受累，可在治疗作用下重新活化、分裂增殖，由无功能状态转变为功能状态，成为白癜风治疗恢复时黑素细胞的来源。

一般认为，人毛乳头细胞(dermal papilla cells，DPC)在毛囊的发育及周期性生长调控中起重要作用。要阐明人毛乳头细胞对调节毛囊黑素细胞的重新活化和分裂增殖机制，必须从人毛乳头细胞自身分泌的生物活性成份着手，这也是今后白癜风研究的重要内容之一。本发明在建立人毛乳头细胞体外培养模型基础上，应用1、2、3代人毛乳头细胞的培养上清制成条件培养基，观察人毛乳头细胞条件培养液(dermal papilla cell conditional mediumDPCCM)对白癜风的治疗作用，并将人毛乳头细胞条件培养液制成冻干粉，初步应用于白癜风患者，发现其对白癜风有确切的治疗效果。

发明内容

鉴于上述，本发明的目的在于提供一种治疗白癜风的药物。

本发明的另一目的在于制备的冻干粉在治疗白癜风药物中的用途。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

一种用基础培养基培养的1、2、3代人毛乳头细胞的培养上清液制备治疗白癜风药物，其特征在于所述基础培养基按15ml人AB型血清与85ml低糖DMEM培养基，0.24gHepes，0.2g碳酸氢钠，0.03g L-谷氨酰胺的配比构成。

本发明的优点和产生的有益效果是：

人毛乳头细胞为分泌性细胞，在体外培养时可分泌许多蛋白质，这些蛋白质可促进毛囊的生长和发育，在体外实验已证明其有确切的生物学活性，但其应用于临床治疗白癜风还未见报道，本发明在原有的培养人毛乳头细胞的基础上，改进其培养基，用人AB型血清替代小牛血清，成功地培养出人毛乳头细胞，收集培养过1、2、3代人毛乳头细胞的基础培养基，用于临床治疗白癜风，观察其治疗效果，发现有确切的治疗作用，取得了良好的经济效益和社会效益。

应用本发明制备的药物在治疗白癜风中有明显的疗效，本药物所用细胞和培养血清均对人体均无抗原性，用于人体无任何过敏反应，本发明用含人AB型血清的基础培养基培养人毛乳头细胞，较以前用小牛血清培养人毛乳头细胞在技术上取得了突破，为本药物应用于临床奠定了基础，这也是本发明关键技术的核心所在。此外，本发明所用药物为皮下注射，其有效药物利用度大大提高，其制备工艺十分考究，实用性强，能为广大患者服务。

附图说明

图1为本发明治疗白癜风前示意图，按白癜风皮损的矢状中线为界，图的左侧皮损为治疗部位，图的右侧皮损为空白对照部位

图2为本发明治疗白癜风1月后示意图

具体实施方式

下面通过实施例对本发明再作进一步的说明：

药物的制备方法及其临床应用是通过以下步骤来实现：

(1).试剂和材料

低糖DMEM培养基：购自Sigma公司。Hepes：购自Boehringer Mannheim公司。健康人AB型血清：第三军医大学西南医院输血科提供。

(2).药物制备的方法

2.1基础培养基的制备：

2.1.1人AB型血清的制备

a)采集健康献血员(经查排除HIV、HBV、HCV、梅毒螺旋体感染)全血200ml入无抗凝剂的血袋；

b)将全血血袋37℃水箱中放置1小时；

c)2000rpm离心30分钟；

d)用血清分离器分离人AB型血清，所分离的人AB型血清可放入-20℃；

e)将人AB型血清袋从-20℃冷冻箱中取出，放入4℃冷藏箱中12小时；