[发明专利]一种新型糖苷水解酶抑制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物药物的研究开发领域，具体涉及从微生物球孢链霉菌的发酵液中提取制备一种新型糖苷水解酶抑制剂的制备方法。

背景技术

糖尿病是一组由遗传因素及环境因素引起的临床综合症，是全世界发病率最高的疾病之一。流行病学的研究表明，空腹血糖水平与餐后血糖水平这两大血糖指标中，餐后血糖水平尤为重要，它是葡萄糖耐受受损(IGT)的病人发展为II型糖尿病的重要因素，是引起糖尿病人大血管并发症和微血管并发症的重要因素，而这些并发症是引起糖尿病人死亡率增大的一个重要原因。所以，严格控制餐后血糖的抗糖尿病药物对糖尿病的防治具有很大的应用价值。

α-淀粉酶抑制剂以人体唾液及胰α-淀粉酶为作用靶点，通过抑制其活性，可以降低食物中淀粉等碳水化合物水解形成寡糖的速度；α-葡萄糖苷酶抑制剂以人体小肠上皮绒毛膜刷状缘上多种双糖酶为作用靶点，通过抑制其活性，使蔗糖、麦芽糖等双糖降解速度减缓。两种酶抑制剂都属于糖苷水解酶抑制剂，二者协同作用，可以延缓碳水化合物的消化和吸收，使葡萄糖的生成和吸收减缓，达到降低餐后高血糖，减少糖尿病病发症发生的目的。α-葡萄糖苷酶抑制剂还可影响脂肪生成及脂肪酸的代谢，降低甘油三酯水平，有利于预防糖尿病心血管及微管(视网膜)病变的发生与发展。

目前临床上应用的糖苷酶抑制剂类药物阿卡波糖(商品名：拜糖苹)，是从游动放线菌的发酵代谢产物中提取得到，其提取工艺复杂，而且需用酸性洗脱液，容易对环境造成污染(参考专利02136309.9)。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型糖苷水解酶抑制剂生产的制备方法，它是从球孢链霉菌的发酵产物中提取得到糖苷水解酶抑制剂，其提取工艺简单，不使用酸碱，有利于环保，且提取得到的糖苷水解酶抑制剂对胰α-淀粉酶及α-葡萄糖苷酶同时具有抑制活性。

本发明的目的是这样实现的，一种新型糖苷水解酶抑制剂生产制备方法，其特征是：它由球孢链霉菌发酵液经过高温杀菌、超滤、纳滤，以及大孔吸附树脂吸附、洗脱，减压浓缩后冷冻干燥得到。

所述的新型糖苷水解酶抑制剂的具体生产方法是：

(1)收集购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，编号为4.187的球孢链霉菌(Streptomyces globisporus Waksman)发酵液，升温至90℃杀菌；

(2)上述发酵液经超滤，除去分子直径大于0.1μm的菌丝体、可溶性蛋白、培养基和色素，得到黄色透明超滤液，测定超滤液中α-淀粉酶抑制剂和α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制活性；

(3)上述超滤液经纳滤，除去分子量小于300Da的色素和无机盐及小分子杂质，得到淡黄色透明浓缩液，测定浓缩液中α-淀粉酶抑制剂和α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制活性；

(4)上述浓缩液经过大孔吸附树脂吸附；用蒸馏水洗至流出液无色后，再用有机溶剂进行梯度洗脱，分管收集，减压浓缩除去洗脱液中的乙醇后，分别测定各管浓缩液中α-淀粉酶抑制剂和α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制活性，收集合并具有抑制活性的各管；

(5)活性组分经冷冻干燥即可得到α-葡萄糖苷酶抑制剂样品。

所述的超滤采用的是膜孔径为0.1-0.2μm的管式无机陶瓷膜。

所述的纳滤采用的是有机卷式聚醚砜膜，截留分子量为100-300Da。

所述的大孔吸附树脂是非极性大孔吸附树脂。

所述的吸附是浓缩液以4.5BV/h的流速经过大孔吸附树脂。

所述的有机溶剂梯度洗脱是用0-95％的乙醇以1.5BV/h的流速进行梯度洗脱。

本发明的特点是：从球孢链霉菌的发酵产物中提取得到糖苷水解酶抑制剂，其提取工艺简单，不使用酸碱，有利于环保，且提取得到的糖苷水解酶抑制剂对猪胰α-淀粉酶及α-葡萄糖苷酶同时具有抑制活性，且抑制活性远远高于阿卡波糖，是一种新型的糖苷水解酶抑制剂。

1、本发明制得的糖苷水解酶抑制剂可同时抑制糖代谢过程的关键酶α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的生物活性，抑制活性高，应用价值大，可用于降糖、减肥产品的开发；

2、本发明制得的糖苷水解酶抑制剂是由球孢链霉菌经发酵制得，不同于阿卡波糖的生产菌种游动放线菌；

3、本发明采用膜分离技术用于发酵液中糖苷水解酶抑制剂的提取，选择性地去除一定分子量范围的杂质，提高了提取物的纯度；

4、本发明选用的大孔吸附树脂对糖苷水解酶抑制剂的吸附量大，洗脱方便，低浓度的有机溶剂即可洗脱，可减少对环境的污染；