[发明专利]具有生物活性的组织修补材料及其制备方法

权利要求书

1.一种具有生物活性的组织修补材料的制备方法，包括细胞获取的步骤， 其特征在于，具体步骤如下：

1)、细胞获取：所述细胞为人体成体细胞或是人体成体干细胞，根据所 修复组织受区的需求确定细胞类型，按常规的细胞培养方法进行体外培养， 细胞的大规模扩增采用细胞工厂或生物反应器的方法进行；

2)、脱细胞小肠粘膜下层的制备：取哺乳动物的空肠用水冲洗干净，切 成所需长度，置于含有过氧乙酸和乙醇的水溶液中浸泡消毒不低于1小时； 用磷酸盐缓冲液漂洗；机械刮除小肠粘膜、肌层和浆膜，用磷酸盐缓冲液漂 洗，获得粘膜下层；将其置入0.1～1M的NaOH溶液中浸泡8分钟以上，用 磷酸盐缓冲液漂洗至pH中性；再将其置入含有DNA酶和α-半乳糖苷酶的混 合溶液中浸泡25分钟以上，用磷酸盐缓冲液漂洗；经脱水干燥后使用牛血 清或胶原蛋白或多聚赖氨酸或精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的任一种溶液浸泡 20分钟以上，再经干燥后形成脱细胞小肠粘膜下层，灭菌消毒；其中，所 述过氧乙酸的终浓度体积比为0.1～0.5％，乙醇的终浓度体积比为2～10％； 所述DNA酶的终浓度为30～50U/ml，α-半乳糖苷酶的终浓度为10～25U/ml；

3)、专用培养液的配制，其组分按体积百分比包括有：商用最低必需培 养液DMEM67.5％、商用培养液F1222.5％、胎牛血清5～15％，胰岛素1～ 50μg/ml、碱性成纤维细胞生长因子1～10ng/ml、氢化可的松10～500 ng/ml、腺嘌呤0.2～0.25mM、转铁蛋白1～10μg/ml、维生素C10～50μg/ml；

4)、具有生物活性的组织修补材料的制备：将体外扩增培养的细胞用与 步骤1)相同的细胞培养液悬浮，按10⁴～10⁶个/cm²的密度滴加在脱细胞小 肠粘膜下层表面，在5％CO₂环境中37℃条件下静置贴附，置入专用培养液 中培养2～3天；弃去培养液，将脱细胞小肠粘膜下层未种植细胞的一面向 上，再按照上述方法以10⁴～10⁶个/cm²的密度种植细胞，静置后加入专用培 养液培养2～3天；再将两面复合有细胞的脱细胞小肠粘膜下层置于培养器 皿内的培养支架上继续培养5～8天，每2天换液，培养完成；得到具有生 物活性的组织修补材料，上述的培养条件均为37℃的5％CO₂环境。