[发明专利]一种冻干人淋巴细胞表面抗原质控品及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学免疫学中的质控品，尤其涉及一种冻干人淋巴细胞表面 抗原质控品及其制备方法。

背景技术

淋巴细胞在整个机体免疫应答过程中起着核心作用。在外周血白细胞中， 淋巴细胞占20％～50％[绝对值(1～3.3)×10⁹/L]，其主要包括T细胞、B细胞 和NK细胞。由于淋巴细胞是不均一的细胞群体，它包括了许多具有不同免 疫功能的亚群，因此用免疫学技术测定淋巴细胞表面标志物，可用于判断人 体的免疫功能，有助于人体的预防保健及疾病的诊断、治疗和预后。

目前，测定淋巴细胞表面标志物的方法很多，但无论何种方法，都是应 用免疫学抗原-抗体反应的原理，即被测表面标志的特异性单克隆抗体与淋巴 细胞反应，通过采用不同的方式(如荧光、染色或花环)显示阳性细胞而获 得结果的。

当前，测定淋巴细胞CD系列的单克隆抗体(McAb)已在世界范围内进 行了规模化、商品化生产，各个实验室根据自身的实际情况选择不同的CD McAb生产厂家、不同的CD McAb品种和淋巴细胞亚群的测定方法。目前， 由于各实验室选用的检测方法不同，实验仪器型号不一，且中国人的淋巴细 胞亚群参考值尚无统一定论，因此在实际工作中暂时参照各自所选用的试剂 盒说明书中的参考值作为判断标准，从而致使淋巴细胞亚群检测结果的可靠 性、可比性差，检测质量难以保证。

目前《全国临床检验操作规程》(中华人民共和国卫生部医政司编，第三 版，东南大学出版社，2007：349；第二版1997：381-384和第一版1991：286-287) 中规定的用于细胞免疫检测的质量控制的试剂是使用液氮冻存的活淋巴细 胞，该试剂通过预试验选择合格供者，自静脉取空腹抗凝(肝素或乙二胺四 乙酸)血，分离淋巴细胞，洗涤2～3次，混悬于细胞冷冻保存液中获得，然 后进行小量分装后置液氮中保存，液氮罐置于冷库中，在每批试验中用作质 量控制。使用时，从液氮罐中取出一支细胞冻存管，迅速移入37℃水浴中复 苏，吸出细胞悬液于另一离心管中离心，弃上清，洗涤2～3次，根据用途加 入定量细胞悬浮液悬浮，调节到所需细胞浓度备用。但是在该技术中，细胞 须在液氮中冷冻保存，且液氮罐须置于冷库中，保存要求条件严格、设备条 件苛刻，使得保存费用很高；同时因为保存的是活的细胞，一旦操作过程和 实验条件稍有不当，细胞就很容易损伤和死亡，从而影响细胞抗原性和试验 结果，因此普通临床实验室常因无此条件和能力而无法进行此项试验，而有 条件者在实际使用时往往由于细胞分离、冻存、复苏过程技术要求高，操作 复杂，费时费力，且有效期短而难以得到有效推广。

由于淋巴细胞表面抗原属于不稳定抗原，在保存过程中极易丢失，因此 应用活的淋巴细胞质控品，无法解决实际工作中普遍应用的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种使淋巴细胞失去生物学活性而保 存其抗原活性，并尽可能地保持淋巴细胞形态结构的适用于不同人淋巴细胞 表面抗原检测方法、不同地域、不同条件的实验室的不同操作者的冻干人淋 巴细胞表面抗原质控品。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种用冷冻干燥的方法使淋巴 细胞表面抗原长期稳定存在的冻干人淋巴细胞表面抗原质控品的制备方法。

为解决上述问题，本发明所述的一种冻干人淋巴细胞表面抗原质控品， 其特征在于：它是由经固定剂固定后的人淋巴细胞和保护剂组成的细胞浓度 为400～600万/mL的细胞悬液；其标示值为CD3⁺：37.2～69.1％，CD4⁺： 17.9～33.7％，CD8⁺：12.4～23.9％，CD4⁺/CD8⁺：0.98～1.94。

所述固定剂为体积浓度为0.02％～4％、pH值为7.0～7.4的中性缓冲甲醛 溶液；该溶液是指将蒸馏水和质量浓度为40％的甲醛按9：1的体积比混合后， 加入碳酸钙，使其呈过饱和状态，即得到pH值为7.0、质量浓度为4％的中 性甲醛溶液，然后将该中性甲醛溶液与pH值为7.0～7.4的无钙、镁汉克氏平 衡盐溶液按1：99～0的体积比配制而成。