[发明专利]已糖激酶法检测葡萄糖的试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于一种含有酶的葡萄糖检测方法的试剂盒，特别是涉及一种已糖激酶法检测葡萄糖的试剂盒及制备方法。

背景技术

葡萄糖的测定方法已知的就有12种之多，在这些方法中，有的方法易受反应液中还原性物质、其它糖类干扰而产生伪阴性与伪阳性偏差而很少应用。目前，国内外检测葡萄糖最常用的方法是酶法，以酶为试剂可以提高特异性，临床实验室常使用葡萄糖氧化酶(GOD)法和己糖激酶(HK)法测定葡萄糖。葡萄糖氧化酶法易受维生素C、尿酸、尿素、胆红素、肌酐的干扰，而以上各物质对己糖激酶法无干扰。己糖激酶法测定血液中的葡萄糖因其特异性强、精密度和准确度非常高是目前国际上公认测定葡萄糖的参考方法而被广大实验室采用。

目前各实验室使用的已糖激酶法试剂盒，虽由多家单位生产，但其中各种试剂盒的试剂基本相似，缓冲液PH都在7.5±0.2，可使还原型辅酶I(NADH)或还原型辅酶II(NADPH)活性最高；差异在于已糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、三磷酸腺苷(ATP)、辅酶I(NAD⁺)或辅酶II(NADP⁺)加入浓度不同。

下面是几种厂家己糖激酶法试剂盒配方

《全国临床检验操作规程》中配方：

三乙醇胺盐酸缓冲液(PH7.5)50mmol/L

MgSO₄             2.0mmol/L

ATP               2.0mmol/L

NADP⁺             2.0mmol/L

HK                ≥1500U/L

G6PD              2500U/L

使用方法：样品∶试剂＝1∶100，混匀后10分钟检测。

日本OLYPUS配方：

PIPES缓冲液           24.0mmol/L

Mg²⁺                  2.37mmol/L

ATP                   2.0mmol/L

NAD⁺                  1.32mmol/L

HK                    600U/L

G6PD                  1600U/L

稳定剂                   适量

使用方法：样品∶试剂I∶试剂II＝1∶100∶20，混匀后5分钟检测。

德国LEADMEN生化技术有限公司配方：

缓冲液                100mmol/L(PH7.6)

ATP                   4.0mmol/L

NAD⁺                  3.0mmol/L

HK                    >100U/mL

G6PD                  >300U/mL

叠氮钠                0.09％

使用方法：样品∶试剂I∶试剂II＝1∶100∶20，混合后5分钟检测。

上海丰汇医学科技有限公司配方：

三乙醇胺盐酸缓冲液         50mmol/L

ATP                        1.5mmol/L

NAD⁺                       0.7mmol/L

HK                         2000U/L

G6PD                       3000U/L

使用方法：样品∶试剂I∶试剂II＝1∶120∶30，混匀后3分钟检测。

上海长征-康仁医学科学有限公司配方：

三乙醇胺盐酸缓冲液          50mmol/L(PH7.5±0.2)(25℃)

ATP                         1.3mmol/L

NAD⁺                        0.65mmol/L

HK                          ≥1500U/L

G6PD                        ≥2500U/L