[发明专利]一种提高真菌产紫杉醇产率的双液相发酵方法

权利要求书

1.一种提高真菌产紫杉醇产率的双液相发酵方法，其特征在于：在培养基中培养菌种保藏号为CGMCC No.2694的拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora)NK17，当菌体生长达到平台期，加入体积浓度为1％甲醇、2％乙酸乙酯或0.5％-1％氯仿的有机溶剂继续培养，以使在所述微生物细胞内和所述培养基中产生和聚集紫杉醇，以及从所述细胞内和培养基中回收并提纯紫杉醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的培养基为自然pH的PDB培养基，其组成为g/L：马铃薯180-220g，蔗糖20g。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的培养是在需氧条件下进行，温度为28-30℃，发酵初始pH值为PDB培养基自然pH，培养转速为180-220rpm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于菌体是在500mL-1L三角瓶中发酵培养，接种方式采用块状菌丝体的接种方式。

5.根据权利要求1至4中任意一项所述的方法，其特征在于所述的回收并提纯紫杉醇的步骤包括：

(1)从所得培养液分离出发酵菌体和发酵上清液；

(2)用有机溶剂提取所得发酵菌体，提取液与上步的发酵上清液一起进行浓缩；

(3)将第(2)步所得物用色谱纯化的方法纯化，得产物紫杉醇。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于在第(2)步浓缩前用饱和Na₂CO₃溶液调节提取液与发酵上清液的pH值为6.0-8.0。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：第(3)步所述的色谱纯化方法中，使用一个或一个以上的色谱柱，填料为C18，流动相为甲醇/H₂O。