[发明专利]黑曲霉液态发酵果胶酶及其对白水和纸浆中胶体物质控制

权利要求书

1.一种黑曲霉液态发酵果胶酶制备方法，其特征在于：使用的生产菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址是北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏日期2008年11月25日，保藏号CGMCC No.2784，通过黑曲霉液态发酵产果胶酶，发酵步骤包括：

发酵方法：

1)培养基的制备

种子培养基：摇瓶种子培养基：麸皮10～30g/L；葡萄糖20～30g/L；(NH₄)₂SO₄ 10～20g/L；KH₂PO₄1～3g/L；MgSO₄·7H₂O 0.5～1g/L，pH值4.0～6.0；

发酵培养基：摇瓶发酵培养基：麸皮40～50g/L；(NH₄)₂SO₄ 10～30g/L；NaCl 1～4g/L；MgSO₄·7H₂O 0.5～3g/L；pH值4.0～6.0；

2)发酵培养

将黑曲霉试管斜面菌种接入液体种子发酵罐中，在温度30℃，搅拌速度120r/min、通风量0.2m³/h的条件下发酵36h～72h，得到所需要的液体种子；然后按照3％～5％的接种量将种子接入黑曲霉发酵罐，在温度30℃～50℃，搅拌速度120r/min，通风量0.2m³/h的条件下发酵36～72h，然后经过离心分离制得所需果胶酶液，并将其储存在果胶酶存储罐中以备用；

3)果胶酶液提纯

用截留分子量10000的超滤膜对发酵液样品进行超滤浓缩至原体积的1/10～1/2后，收集浓缩粗酶液备用，进行硫酸铵分级沉淀预实验，确定硫酸铵分级沉淀的浓度为40％～100％，将粗酶液离心去除菌体，向上清液中加入硫酸铵至40％饱和度，4℃放置24h，经4℃，8000r/min离心10min后，上清液继续加入硫酸铵至100％饱和度，4℃放置24h，经4℃，8000r/min离心30min后，收集沉淀，将其溶于pH6.0的乙酸-乙酸钠缓冲液中，用透析袋透析，得到提纯后的果胶酶液，果胶酶液的酶学性质为，最适反应温度30～60℃，最适pH值4～6，30～60℃下保温2h后剩余酶活高于90％。

2.一种采用权利要求1制备的果胶酶应用于处理造纸白水中溶解和胶体物质，其特征在于：加入果胶酶液至白水中，处理温度为30～60℃，处理时间20～60min，所述白水为以机械浆和化学机械浆为主要浆料的造纸机白水，用于处理白水的果胶酶酶液的用量为15U～50U/100mL白水。

3.一种采用权利要求1制备的果胶酶应用于控制纸浆中的溶解和胶体物质的方法，其特征在于：果胶酶添加入纸浆中，添加用量为3U～10U/g绝干浆，所述纸浆浆种为机械浆和化学机械浆。