[发明专利]里氏木霉液体深层发酵纤维素酶及其酶促打浆工艺

权利要求书

1.一种纤维素酶的制备方法，其特征在于：所述纤维素酶，其使用的生产菌株为里氏木霉(Trichoderma reesei)，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址是北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏日期2008年11月25日，保藏号为CGMCC No.2785，所述纤维素酶的制备方法如下：

将里氏木霉试管斜面菌种接入液体种子发酵罐(1)中进行种子发酵得到所需要的液体种子，然后按照一定的接种量将液体种子接入纤维素酶发酵罐(2)，并且在一定的发酵工艺条件下发酵，最后经过离心分离制得所需纤维素酶酶液，并将其储存在纤维素酶存储罐(3)中以备用，所述发酵工艺参数如下：

1)、里氏木霉试管斜面培养基：1％-2％CMC，4％-8％营养元素液，0.1％-0.5％微量元素液，2％-3％琼脂，pH6.0；

2)、里氏木霉菌种的培养：将菌种接于斜面培养基上，在培养箱中于29±1℃条件下培养4-7天后使用或4℃下保存备用；

3)、液体种子发酵培养基：1％-3％葡萄糖，4％-8％营养元素液，1％-4％麸皮，0.1％-0.4％微量元素液；

4)、纤维素酶发酵培养基：碳源为0.1％-3％速生材硫酸盐浆，8％-10％营养元素液，0.2％-0.5％微量元素液，1％-4％麸皮，0.1％-0.2％表面活性剂Tween-80；

5)、液体种子发酵条件：温度30-40℃，pH5-7，搅拌速度250-300r/min，通风量0.2-0.3m3/h，发酵时间36-48h；

6)、纤维素酶发酵条件：温度30-40℃，pH5-8，接种量2％-3％，搅拌速度250-300r/min，通风量0.2-0.3m3/h，发酵时间72-96h；

所述营养元素液其配方为：取3-10g柠檬酸钠，5-20g磷酸二氢钾，1-10g硫酸铵，0.5-5g硫酸镁，0.1-5g氯化钙溶解后定容至100ml；

所述微量元素液配方为：1-5g硫酸亚铁，0.1-1g硫酸锰，0.1-1g氯化锌，0.5-5g氯化钴，1-10ml 2N HCl溶解定容到100ml；上述所有百分比均以重量计。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于：所述碳源为思茅松硫酸盐浆。

3.权利要求1所述的方法，其特征在于：酶液的制备过程中，种子发酵培养基采用：1％葡萄糖，4％营养元素液，1％麸皮，0.1％微量元素液，在温度30℃，pH为6，搅拌速度250r/min，通风量0.2m3/h的条件下发酵48h，得到所需要的液体种子；然后按照2％的接种量，将种子接入纤维素酶发酵罐(2)，发酵培养基采用：碳源为0.1％的速生材硫酸盐浆，8％营养元素液，0.2％微量元素液，1％麸皮，0.2％表面活性剂Tween-80，在温度30℃，pH6；接种量2％，搅拌速度300r/min；通风量0.3m³/h的条件下发酵96h。

4.一种采用权利要求1所述方法制得的纤维素酶用于酶促打浆的方法，其 特征在于：纸浆为速生材硫酸盐浆，按照权利要求1所述的方法制备纤维素酶并将其储存在纤维素酶存储罐中以备用，将纤维素酶存储罐(3)中的酶液通过计量泵以7u/g的酶用量以FPA酶活为单位，输送到纸浆反应池(4)对纸浆进行预处理，处理条件为：浆浓10％、温度50℃、pH7.8、处理时间1h，经纤维素酶处理后的纸浆输送到盘磨机(5)进行打浆。