[发明专利]一种抗农药亚胺硫磷的特异性抗体

权利要求书

1.抗农药亚胺硫磷的抗体其特征在于使用N-邻苯二甲酰亚胺基-6-氨基己酸作为半抗原与血蓝蛋白KLH连接合成人工抗原，免疫新西兰大白兔，取血，分离出抗血清纯化制得。

2.权利要求1所述的农药亚胺硫磷半抗原其特征在于使用N-邻苯二甲酰亚胺基甲酯和6-氨基己酸为原料合成分子式为

的化合物作为半抗原。

3.权利要求1所述的农药亚胺硫磷的人工抗原其特征在于使用半抗原N-邻苯二甲酰亚胺基-6-氨基己酸与血兰蛋白合成。

4.权利要求1所述的农药亚胺硫磷半抗原N-邻苯二甲酰亚胺基-6-氨基己酸其特征在于是用下述步骤制得：准确称取0.1250g的氨基己酸，0.0960g的无水Na₂CO₃溶于5.0mL蒸馏水中，加入0.2550g N-邻苯二甲酰亚胺基甲酯，室温搅拌至完全溶解，约1小时终止反应，反应液过滤后用乙酸乙酯提取，提取液用无水Na₂SO₄干燥，制得半抗原。

5.权利要求1所述的免疫动物制备特异性抗体的方法如下：

免疫动物选用雌性新西兰大白兔，免疫方法采用皮下和肌肉注射法，初免后进行四次加强免疫，加强免疫分别于初次免疫后2周、4周和6周后免疫三次，此后间隔一个月进行第五次免疫，9天后由兔子的耳缘静脉取血，进行效价检测，具体做法是：

初次免疫：取1mg按照权利要求3所述方法合成的人工抗原溶于0.9％的NaCl溶液和弗氏完全佐剂等体积所配制的溶液中，进行动物免疫；

加强免疫：用0.5mg上述人工抗原溶于0.9％的NaCl溶液和弗氏不完全佐剂等体积所配制的溶液，进行动物免疫；

抗体纯化：定时监测动物抗体效价，当抗体对一定的包被抗原达到适宜效价时，采集血液，并离心获得抗血清，使用G-Sepharose蛋白亲和层析柱对抗血清进行纯化，制备获得抗农药亚胺硫磷的特异性抗体。

6.用权利要求1所述的农药亚胺硫磷半抗原N-邻苯二甲酰亚胺基-6-氨基己酸分别与卵清蛋白OVA和辣根过氧化物酶HRP连接，合成包被抗原和酶标抗原用于建立亚胺硫磷的酶联免疫检测方法。