[发明专利]乳酸杆菌外膜蛋白提取工艺

说明书

技术领域

本发明涉及生物制品领域，具体的说是提供一种作为微生物添加剂的乳酸杆菌外膜蛋白的提取方法。

背景技术

药物饲料添加剂的广泛运用，尤其是抗生素饲料添加剂的利用，在动物防病治病等方面发挥重要作用的同时，也给畜牧生产和人类带来了一定的副作用。首先是抗生素在杀灭致病菌的同时，也杀灭了对动物机体的有益菌，破坏肠道内微生物的微生态平衡，导致动物，特别是幼畜禽对病原微生物的易感性。另外，长期饲喂抗生素会使动物机体内产生具有耐药性的细菌，这些细菌对人畜均有害。为此，各国都在积极进行各种新型抗生素替代品的研究开发，其中微生态制剂已目前研究的主要热点之一。

微生态饲料添加剂是根据微生态学理论研制的含有对动物有益微生物的活菌制剂，它们通过维持动物肠道内微生态平衡而发挥作用，具有促进动物生长发育，提高动物机体免疫力等多种功能，且无污染、无残留、无耐药性和对环境无害等，是一类新型绿色环保饲料添加剂。这些禽畜用的益生菌制剂含有芽孢杆菌，乳酸杆菌，粪链球菌，双歧杆菌，酵母等，光合细菌和梭状芽胞杆菌属的部分菌株及噬菌蛭弧菌等也偶然被用做益生菌添加到仔猪和仔鸡饲料中。

微生态制剂的作用机理：一般认为微生态制剂对促进畜禽健康的作用机理包括以下几个方面：1.帮助寄主肠道有益菌群尽快达到或者维持其生态平衡；2.饱和肠粘膜的吸附位点，致使病原菌无法在肠粘膜上定植；3.发酵碳水化合物，产生短链脂肪酸等代谢产物，降低肠道内pH值，从而抑制肠道内发酵蛋白质的菌群活性，控制其发酵速度；4.刺激寄主免疫细胞的活性，提高免疫球蛋白的水平；5.刺激寄主产生多种消化酶，协同寄主增加对维生素等营养物质的消化吸收。

活菌微生态制剂在动物养殖中的作用：活菌制剂始于上世纪初，有人用酸牛奶来调整幼畜腹泻出现的肠道微生物菌群失调。后来，在研究中人们发现用活菌制剂可防止畜禽的腹泻和肠炎，继之又发现活菌制剂还可改善动物对饲料的利用，并有利于促进畜禽的生长发育和肠道健康，从而扩大了活菌制剂在畜牧生产中的作用和应用前景，概括起来，主要有以下几个方面的作用。

改善动物胃肠道微生态环境：研究表明，动物自身及许多致病菌不会产生各种有毒物质，如胺、氨、细菌毒素、氧自由基等代谢产物。有些有益菌可以阻止毒性胺和氨的合成或把它们分解中和细菌毒素，从而避免这些有害物质对动物机体组织细胞的损害作用。一些好氧菌则通过产生超氧化物歧化酶来消除氧自由基，减少或消除氧自由基对细胞及细胞器膜质结构的损害。乳酸菌能够产生有机酸和抗菌物质，降低肠道内pH值和氧化还原电位，有利于宿主生长发育和维持肠道健康。

产生有益物质：动物微生态活菌制剂能够在动物体内产生各种消化酶，合成B族维生素、维生素K等动物所必需的营养物质；同时能促使动物体增加对肠道内容物中钙、镁等营养物质的吸收。

建立和维持肠道微生态平衡：研究表明，动物肠道内寄居的微生物，主要为厌氧菌。通常情况下，肠道内有益菌和致病菌会保持一定比例，当条件发生改变时，致病菌大量繁殖引起平衡失调，从而导致动物体患病。当需氧型益生菌进入消化道后，生长繁殖消耗肠道内大量氧气，通过“生物夺氧”使需氧型致病菌大幅度下降，因而起到防止动物患病的作用。研究还发现，益生菌能够有秩序地定植于粘膜、皮肤等表面或细胞之间形成生物屏障，这些屏障可以阻止病原微生物的定植，起着占位、争夺营养。互利共生或拮抗作用，形成保护屏障，阻止病原菌的侵入，从而对致病菌的定植产生抑制作用。

增强动物免疫能力和促进动物生长：微生态制剂可作为非特异性免疫调节因子，增强吞噬细胞的吞噬能力和细胞产生抗体的能力，刺激动物产生干扰素，从而增强抗病能力。据报道，用活菌微生态制剂——益生素饲喂哺乳仔猪，添加组腹泻率明显比对照组减少(3.91％，P<0.01)，成活率提高79％。在10～28日龄的仔猪饲料中添加益生素，试验组采食量平均比对照组增加70g/d，增重提高4.2％。又有研究报道，在雏鸡中分别饲喂和不饲喂乳酸杆菌制剂两个组的基础上，进行鸡的白痢沙门氏菌攻毒试验。结果表明，饲喂乳酸杆菌雏鸡组与对照组相比，死亡率明显降低了20％。还有报道称在鱼虾饲料中添加微生态制剂，可使鱼虾增重提高10％～20％。