[发明专利]重组人干扰素α2b DNA片段及编码的蛋白质

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物工程技术领域，涉及一种重组人干扰素DNA片段及编码的蛋白质。

背景技术

干扰素α(interferon，IFNα)是一种细胞因子，具有抗肿瘤增生、抗病毒等生物活性，在炎症、病毒和恶性肿瘤等方面具有显著疗效。采用分子生物学及DNA重组技术，已经研发上市了重组人干扰素。但是人干扰素α2b作为药物，并没有达到最大优化，有的人干扰素α2b其比活不够高，也有的可溶性程度不高。人们不断应用新方法和技术，对人干扰素α2b进行改造，试图寻找和发现比活更高、可溶性程度较高的新型人干扰素。基因工程和PCR方法为改造干扰素基因序列提供了有力的技术支持，用于获得更高活性的干扰素α2b，提高疗效和延长半衰期。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种重组人干扰素α2b DNA片段。

本发明的第二个目的是提供第二种重组人干扰素α2b DNA片段。

本发明的第三个目的是提供第二种重组人干扰素α2b DNA片段编码的蛋白质。

本发明的第四个目的是提供第三种重组人干扰素α2b DNA片段。

本发明的第五个目的是提供第三种重组人干扰素α2b DNA片段编码的蛋白质。

本发明的第六个目的是提供第四种重组人干扰素α2b DNA片段。

本发明的第七个目的是提供第四种重组人干扰素α2b DNA片段编码的蛋白质。

本发明的技术方案概述如下：

一种重组人干扰素α2b DNA片段，它是序列表SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列。

第二种重组人干扰素α2b DNA片段，它是序列表SEQ ID NO.2所述的核苷酸序列。

序列表SEQ ID NO.2的重组人干扰素α2b DNA片段编码的蛋白质，它是序列表SEQID NO.3所述的氨基酸序列。

第三种重组人干扰素α2b DNA片段，它是序列表SEQ ID NO.4所述的核苷酸序列。

序列表SEQ ID NO.4的重组人干扰素α2b DNA片段编码的蛋白质，它是序列表SEQID NO.5所述的氨基酸序列。

第四种重组人干扰素α2b DNA片段，它是序列表SEQ ID NO.6所述的核苷酸序列。

序列表SEQ ID NO.6的重组人干扰素α2b DNA片段编码的蛋白质，它是序列表SEQID NO.7所述的氨基酸序列。

分别含有序列表SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6的重组人干扰素α2b DNA片段的质粒，用下述两种方法之一构建的：

第一种方法是：根据大肠杆菌EcolC1958基因序列，设计引物扩增得到产物EcolC1958，用XbaI和EcoRI双酶切质粒pET28a和扩增产物EcolC1958，连接，构建出载体pBPE172，将含有序列表SEQ ID NO.2所述的核苷酸序列与载体pBPE172酶切后连接或将含有序列表SEQ ID NO.4所述的核苷酸序列与载体pBPE172酶切后连接或含有序列表SEQ ID NO.6所述的核苷酸序列与载体pBPE172酶切后连接，得到含有序列表SEQ ID NO.2的重组人干扰素α2b DNA片段的质粒或含有序列表SEQ ID NO.4的重组人干扰素α2bDNA片段的质粒或含有序列表SEQ ID NO.6的重组人干扰素α2b DNA片段的质粒。

第二种方法是：将含有序列表SEQ ID NO.2所述的核苷酸序列与载体pET 43.1a酶切后连接或将含有序列表SEQ ID NO.4所述的核苷酸序列与载体pET 43.1a酶切后连接或含有序列表SEQ ID NO.6所述的核苷酸序列与载体pET 43.1a酶切后连接，得到含有序列表SEQ IDNO.2的重组人干扰素α2b DNA片段的质粒或含有序列表SEQ ID NO.4的重组人干扰素α2bDNA片段的质粒或含有序列表SEQ ID NO.6的重组人干扰素α2b DNA片段的质粒。

本发明的重组人干扰素α2b DNA片段编码的蛋白质主要以可溶性方式存在，其抗病毒活性是人天然干扰素的几十倍。其抗肿瘤活性，与人天然干扰素相比，具有较高的抗增殖活性。

附图说明

图1是PCR后的rh-mIFN-1片段的电泳图。

图2是大引物法获得的rh-mIFN-2片段的电泳图。

图3是大引物法获得的rh-mIFN-3片段的电泳图。

图4是重叠延伸获得的rh-mIFN-7片段的电泳图。